艾灸通过诱导热休克蛋白70表达抑制大鼠胃黏膜细胞凋亡线粒体信号转导途径的研究

论文摘要

目的:①通过观察艾灸预处理对健康大鼠不同组织器官HSP70表达的影响,探讨艾灸防病保健理论的分子生物学基础;②通过观察槲皮素灌胃阻断HSP70合成后,艾灸预保护作用是否依然存在,进一步明确艾灸保护作用与HSP70表达的关系;③通过观察艾灸诱导的HSP70对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡及其线粒体信号转导途径中关键物质细胞色素C（Cyt-c）、凋亡激活因子-1（Apaf-1）、Caspase-9和Caspase-3的影响,探讨艾灸预处理抑制胃黏膜细胞凋亡、保护胃黏膜损伤作用的内在机制。方法:本研究分为三个部分。第一部分实验:32只wister健康大鼠随机分为4组,即空白组、捆绑组、艾灸穴位组、艾灸非穴组,8只/组。采用免疫组化方法检测大鼠心肌、脑组织、胃黏膜HSP70蛋白表达的变化,实时定量RT-PCR方法检测大鼠胃黏膜HSP70mRNA的表达。第二部分实验:40只wister健康大鼠随机分为5组,即捆绑组、模型组、艾灸穴位+模型组、槲皮素+艾灸穴位+模型组、槲皮素+模型组,8只/组。采用无水乙醇灌胃方法制备急性胃黏膜损伤大鼠模型,Guth评分法计算大鼠胃黏膜损伤指数（UI）,免疫印迹（Western-blot）方法检测大鼠胃黏膜HSP70表达的变化,原位末端标记（TUNEL）方法检测大鼠胃黏膜细胞凋亡。第三部分实验:32只wister健康大鼠随机分为4组,即捆绑组、模型组、艾灸穴位+模型组、艾灸非穴+模型组,8只/组。采用Western-blot方法检测大鼠胃黏膜Cyt-c的表达,免疫组化方法检测大鼠胃黏膜HSP70、细胞凋亡、Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3的表达。结果:（1）艾灸足三里、梁门穴可诱导健康大鼠心肌、脑组织、胃黏膜HSP70蛋白表达及胃黏膜HSP70mRNA表达上调,与空白组、捆绑组和艾灸非穴组相比,差异具有显著性或非常显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）。（2）与模型组相比,艾灸穴位+模型组大鼠胃黏膜损伤指数（UI）和细胞凋亡均明显减小,HSP70表达则显著升高,差异非常明显（P＜0.05或P＜0.01）。（3）槲皮素阻断HSP70合成后,槲皮素+艾灸+模型组大鼠胃黏膜UI和AI明显高于艾灸+模型,且HSP70表达明显低于艾灸+模型组,差异具有非常显著性意义（P＜0.01）。（4）艾灸足三里、梁门穴可以下调急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞胞浆Cyt-c和Apaf-1含量及Caspase-9和Caspase-3的表达,同时上调HSP70表达,降低大鼠胃黏膜细胞凋亡指数（AI）,与模型组和艾灸非穴+模型组比较具有显著性或非常显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。结论:（1）艾灸预处理可诱导保护性蛋白HSP70在不同组织器官表达上调可能是艾灸“防病保健”作用的物质基础。（2）艾灸预处理可以抑制大鼠损伤胃黏膜细胞凋亡、减轻急性胃黏膜损伤,对胃黏膜产生预保护作用与艾灸诱导的HSP70表达直接相关。（3）艾灸通过诱导HSP70表达抑制细胞凋亡线粒体信号转导途径中的不同靶点是艾灸预处理抑制急性胃黏膜损伤细胞凋亡、保护胃黏膜损伤作用的内在机制。（4）艾灸对胃黏膜保护作用具有一定的穴位特异性,反映了艾灸-穴位-经络的“综合效用”结果。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 中英文名词术语对照表
• 引言
• 第一部分 艾灸足三里、梁门穴对健康大鼠心肌、脑组织、胃黏膜HSP70表达的影响
• 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 施灸材料
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要器械
• 1.5 主要仪器设备
• 2.方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 穴位定位
• 2.3 艾灸方法及皮温测试
• 2.4 实验步骤
• 2.5 热休克蛋白70（HSP70）表达测定
• 2.6 热休克蛋白70（HSP70）mRNA表达测定
• 2.7 统计学方法
• 结果与分析
• 1.艾灸预处理对健康大鼠不同组织器官HSP70表达的影响
• 2.艾灸预处理对健康大鼠胃黏膜HSP70mRNA表达的影响
• 3.讨论
• 3.1 针灸预处理的研究
• 3.2 热休克蛋白70
• 3.3 艾灸预处理对健康大鼠不同组织器官HSP70及HSP70mRNA表达的影响
• 第二部分 槲皮素阻断HSP70合成后艾灸对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡的影响
• 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 施灸材料
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要器械
• 1.5 主要仪器设备
• 2.方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 急性胃黏膜损伤大鼠模型制备方法
• 2.3 穴位定位
• 2.4 艾灸方法及皮温测试
• 2.5 槲皮素灌胃方法
• 2.6 实验步骤
• 2.7 胃黏膜损伤指数（UI）测定
• 2.8 HSP70蛋白表达测定
• 2.9 细胞凋亡测定
• 2.10 统计学方法
• 结果与分析
• 1.艾灸预处理对模型大鼠胃黏膜细胞HSP70表达的影响
• 2.艾灸预处理对模型大鼠胃黏膜损伤指数（UI）的影响
• 3.艾灸预处理对模型大鼠胃黏膜细胞凋亡指数（AI）的影响
• 4.讨论
• 4.1 急性胃黏膜损伤模型的选择与制备
• 4.2 槲皮素与HSP70
• 4.3 艾灸预处理对损伤胃黏膜的保护作用
• 4.4 槲皮素阻断HSP70合成后,艾灸对损伤胃黏膜细胞凋亡的影响
• 第三部分 艾灸通过诱导HSP70表达抑制大鼠胃黏膜细胞凋亡线粒体信号转导途径的研究
• 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 施灸材料
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要器械
• 1.5 主要仪器设备
• 2.方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 急性胃黏膜损伤大鼠模型制备方法
• 2.3 穴位定位
• 2.4 艾灸方法及皮温测试
• 2.5 实验步骤
• 2.6 热休克蛋白70（HSP70）表达测定
• 2.7 细胞凋亡、Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3表达测定
• 2.8 细胞色素C（Cyt-c）表达测定
• 2.9 统计学方法
• 结果与分析
• 1.艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜HSP70表达的影响
• 2.艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞凋亡的影响
• 3.艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜Cyt-c表达的影响
• 4.艾灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜Apaf-1表达的影响
• 5.艾灸对模型大鼠胃黏膜Caspase-9和Caspase-3表达的影响
• 6.讨论
• 6.1 Cyt-c、Caspase与细胞凋亡线粒体信号转导途径
• 6.2 HSP70与细胞凋亡线粒体信号途径
• 6.3 艾灸通过诱导HSP70表达对大鼠胃黏膜细胞凋亡线粒体信号转导途径的影响
• 第四部分 讨论
• 1.祖国"治未病"理论与"逆灸"
• 2.祖国医学对消化性溃疡的认识
• 3.现代医学对胃黏膜损伤与保护的认识
• 3.1 细胞凋亡与胃黏膜损伤
• 3.2 热休克蛋白70与胃黏膜保护
• 4.艾灸法的现代研究与选穴依据
• 4.1 艾灸法的现代研究
• 4.2 本研究的选穴依据
• 5.针灸防治胃黏膜损伤的研究概况
• 5.1 临床研究
• 5.2 实验研究概况
• 6.艾灸预处理保护胃黏膜的内在作用机制
• 6.1 艾灸上调不同组织器官HSP70表达上调是艾灸防病保健的重要环节
• 6.2 艾灸诱导的HSP70表达是艾灸抑制胃黏膜细胞凋亡、保护胃黏膜损伤的物质基础
• 6.3 艾灸通过诱导HSP70表达对细胞凋亡线粒体信号途径的影响
• 7.本研究的创新点
• 8.本研究存在的问题与展望
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附图
• 附录 文献综述
• 参考文献
• 博士研究生在读期间论文发表及科研题录