论文摘要
猪生长激素（porcine growth hormone, pGH）是由猪脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的一种单一肽链的蛋白质激素。本研究主要内容如下: 2. 将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA基因克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a（+）和转移载体pBacPAK-His1 中,构建出了能利用Ni-NTA Agarose 柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020 和重组转移载体pPGH030。2.将pPGH030 与线性化病毒Bm-BacPAK6 共转染家蚕细胞（BmN）,成功获得了猪生长激素重组杆状病毒Bm-BacPAK6-pgh。3.以大肠杆菌BL21 为宿主菌进行了pPGH020 的IPTG 诱导表达。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素基因（rpgh）的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH 抗体。SDS-PAGE 和Western blot 的分析结果表明,26.5k 处有包括His·Taq、thombin 位点序列和pGH 序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。4.用构建的带有His-Tag pgh 融合基因的重组杆状病毒Bm-BacPAK6-pgh 研究了Bm-BacPAK6-pgh 在BmN 细胞和蚕体内的表达。SDS-PAGE 电泳分析显示, Bm-BacPAK6-pgh 在Bm-N 细胞、蚕体中得到了融合表达,表达产物的分子量为25k。Western blot 分析表明,Bm-N 细胞、蚕体中表达的融合蛋白与大肠杆菌表达的pGH具有相同的抗原性。Bm-BacPAK6-pgh 在Bm-N 细胞内的表达始于24h,而蚕体中的表达始于72h,二者的表达峰分别在96h 和120h。5. 对重组病毒Bm-BacPAK6-pgh 的蚕体表达产物进行了纯化,经40%饱和度硫酸铵盐析和Ni-NTA Agarose 亲和柱二步纯化可获得SDS-PAGE 电泳纯的具有抗原性的重组猪生长激素融合蛋白。
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