姜黄素对脂质性肾损害的作用及其机制研究

论文摘要

肾小球硬化是各种终末期肾脏病的最后共同病理特征，脂质代谢异常又是肾小球硬化发生发展的独立致病因素之一。近年来的研究发现炎症反应和氧化应激在脂质性肾损害过程中发挥重要作用。p38丝裂素活化蛋白激酶信号途径是多种细胞在应激条件下调节细胞增殖分化的重要信号通路，参与多种肾脏病理生理过程。现代医学发现姜黄素具有抗炎、抗氧化、降血脂、抑制细胞增殖以及抗纤维化等作用，那么“应用姜黄素是否可以缓解脂质对肾脏的损害，其可能机制如何，p38丝裂素活化蛋白激酶信号途径是否参与此过程?”目前还不十分清楚。本研究旨在通过应用细胞实验和动物实验，从不同水平探讨姜黄素对脂质性肾损害的作用及其可能信号通路，为姜黄素的临床应用提供实验依据和理论基础。 第一部分 p38丝裂素活化蛋白激酶信号途径参与LDL诱导的大鼠系膜细胞增殖和细胞外基质的增生 目的 观察不同浓度LDL或LDL+p38 MAPK特异性的抑制剂SB203580刺激下系膜细胞增殖、MMP-2表达、p38 MAPK活性的改变，明确p38 MAPK是否参与LDL对系膜细胞的损伤过程。方法 以体外培养的大鼠系膜细胞为研究对象，应用不同浓度的LDL或LDL+SB203580刺激系膜细胞。应用MTT法检测细胞增殖；应用RT-PCR和Western Blot的方法检测MMP-2 mRNA和蛋白的表达，应用Western Blot的方法检测p38 MAPK活性。结果 以浓度为3.125-100μg／ml的LDL刺激系膜细胞，可促进系膜细胞的增殖（P＜0.05），在0-50μg／ml的LDL浓度范围内，系膜细胞的增殖和LDL的浓度呈正相关（r=0.865，P＜0.05），应用SB203580预处理细胞可以抑制LDL诱导的系膜细胞增殖（P＜0.05）；以浓度为12.5—100μg／ml的LDL刺激系膜细胞，可上调MMP-2 mRNA的表达（P＜0.05），应用SB203580预处理细胞可以抑制LDL诱导MMP-2 mRNA的表达（P＜0.05）；以浓度为25—100μg／ml的LDL刺激系膜细胞，可下调MMP-2蛋白的表达（P＜0.05），应用SB203580预处理细胞可以上调LDL诱导MMP-2蛋白的表达（P＜0.05）；浓度为12.5—100μg／ml的LDL刺激系膜细胞，可以提高p38 MAPK的活性（P＜0.05），应用SB203580预处理细胞可以抑制LDL诱导p38 MAPK的激活（P＜0.05）。结论 LDL可以诱导系膜细胞增殖和细胞外基质的增生，其可能信号通路与p38 MAPK途径有关。 第二部分 姜黄素下调p38丝裂素活化蛋白激酶抑制LDL诱导的大鼠系膜细胞增殖和基质增生 目的 观察姜黄素对LDL诱导的系膜细胞增殖和细胞外基质增生的作用以及COX-2表达、ROS的产生、p38 MAPK的活性改变在此过程中可能的信号转导作用。方法 以体外培养的大鼠系膜细胞为研究对象，应用不同浓度的姜黄素干预25μg／ml LDL诱导的系膜细胞。应用MTT法检测细胞增殖；应用荧光素法定量检测细胞的ROS；应用RT-PCR和Western Blot的方法检测COX-2／MMP-2 mRNA和蛋白的表达；应用Western Blot的方法检测p38 MAPK的活性。结果 以浓度为6.25-25μ mol／l的姜黄素干预25μg／ml LDL诱导的系膜细胞，可抑制系膜细胞的增殖（P＜0.05），增加MMP-2 mRNA的表达（P＜0.05）；以浓度为12.5-25μmol／l的姜黄素干预时，可上调MMP-2蛋白的表达（P＜0.05），下调COX-2 mRNA和蛋白的表达（P＜0.05），抑制ROS的产生和p38 MAPK的活性（P＜0.05）。结论 12.5-25μmol／l的姜黄素可以抑制LDL诱导的系膜细胞增生和上调MMP-2的表达，其信号转导通路可能与姜黄素抑制COX-2表达和ROS的产生，抑制p38 MAPK信号途径有关。 第三部分 姜黄素对大鼠阿霉素肾病的作用及其机制研究 目的 观察姜黄素对阿霉素肾病大鼠高脂血症、肾脏病理学、MMP-2表达、COX-2表达以及p38 MAPK活性的影响，探讨姜黄素缓解阿霉素肾病的可能机制和信号通路。方法 给予大鼠一次性尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型，1周后姜黄素治疗组大鼠给予姜黄素100mg·kg-1·d-1灌胃。采用免疫组织化学染色、RT-PCR和Western Blot法检测MMP-2、COX-2在肾组织的表达，应用Western Blot法检测p38 MAPK的活性。结果 （1）阿霉素注射大鼠8周后，姜黄素可以减少蛋白尿的产生（P＜0.05），提高血清白蛋白（P＜0.05），降低胆固醇（P＜0.05）、甘油三脂（P＜0.05）、低密度脂蛋白（P＜0.05）。（2）姜黄素缓解阿霉素肾病大鼠肾小球系膜区的增宽（P＜0.05）。（3）姜黄素提高阿霉素肾病大鼠MMP-2的表达水平（P＜0.05）。（4）姜黄素抑制阿霉素肾病大鼠COX-2的表达（P＜0.05）。（5）姜黄素抑制p38 MAPK的活化（P＜0.05）。结论 姜黄素可以减少阿霉素肾病大鼠蛋白尿的排泄以及减轻肾脏组织学的损害。其可能机制与姜黄素改善脂质代谢紊乱、减少肾组织内COX-2等炎性介质的产生，并通过p38 MAPK途径抑制系膜细胞增殖和系膜基质增生有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文 姜黄素对脂质性肾损害的作用及其机制研究
• 前言
• 第一部分 p38丝裂素活化蛋白激酶信号途径参与LDL诱导的大鼠系膜细胞增殖和细胞外基质的增生
• 第二部分 姜黄素下调p38丝裂素活化蛋白激酶抑制LDL诱导的大鼠系膜细胞增殖和基质增生
• 第三部分 姜黄素对大鼠阿霉素肾病的作用及其机制研究
• 结论
• 综述 脂质代谢紊乱与肾脏疾病
• 附录一
• 附录二
• 致谢