论文摘要
[目的]研究表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）在小鼠早期胚胎体外发育的作用以及EGF联合胰岛素生长因子-Ⅱ（insulin-likegrowth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ）对小鼠早期胚胎体外发育是否有协同促进作用。为进一步优化胚胎体外培养以及人类胚胎培养系统提供理论和实验依据。[方法]:取ICR小鼠胚胎随机分为对照组与实验组在体外连续培养（所用基础培养基为mKSOM）,在培养箱中连续培养120小时,每24小时观察胚胎发育情况,分别计算2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率、囊胚率和孵化率,并进行囊胚细胞计数。分组如下:实验一:在mKSOM培养液中添加不同浓度的EGF对ICR小鼠1-细胞胚胎进行体外培养。实验共分五组:1组为空白对照组,2、3、4、5组为实验组,胚胎在分别加入0.1、1、10、100ng/mL浓度EGF的培养液中培养。实验二:观察在mKSOM培养液中同时加入EGF和IGF-Ⅱ对ICR小鼠1-细胞胚胎体外发育的影响。实验共分四组:1组为空白对照组;2组为胚胎在EGF浓度为10ng/ml的培养液中培养;3组为胚胎在IGF-Ⅱ浓度为10ng/ml的培养液中培养;2、3组为单一因子对照组;4组为胚胎在EGF浓度为10ng/ml及IGF-Ⅱ浓度为10ng/ml的培养液中培养。实验三:观察在在mKSOM培养液中同时加入EGF与IGF-Ⅱ,不同的浓度搭配对ICR小鼠1-细胞胚胎体外发育的影响。实验分两步,第一步共分4组:1组为空白对照组;2组为胚胎在EGF浓度为1ng/ml的培养液中培养,为单一因子对照组;3,4组同时加入EGF与IGF-Ⅱ,EGF浓度均为1ng/ml,而IGF-Ⅱ浓度分别为1ng/ml、10ng/ml。第二步实验分五组:1组为空白对照组。2组为在mKSOM培养液中加入10ng/mlEGF对照,3,4组同时加入EGF与IGF-Ⅱ,EGF浓度均为10ng/ml,而IGF-Ⅱ浓度分别为1ng/ml、10ng/ml;5组为第一步得出的EGF与IGF-Ⅱ最优搭配组。[结果]:实验一:与空白对照组比较,各浓度实验组2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率无差异（P＞0.05）。3、4两组两个实验组囊胚率及孵化率显著增加（P＜0.05）,而两组之间比较,囊胚率及孵化率无明显差异（P＞0.05）;各浓度实验组的囊胚细胞计数差异无显著性（P＞0.05）;实验二:与空白对照组比较,组2、组3（单一因子组）的2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率无差异（P＞0.05）;囊胚率、孵化率显著增加（P＜0.05）;囊胚细胞计数差异无显著性（P＞0.05）。与空白对照组以及单一因子对照组比较,组4的2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率无差异（P＞0.05）;囊胚率、孵化率以及囊胚细胞计数显著增加（P＜0.05）;实验三:第一步:与空白对照组比较,组2（单一因子组）的2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率无差异（P＞0.05）;囊胚率、孵化率显著增加（P＜0.05）;囊胚细胞计数差异无显著性（P＞0.05）。与空白对照组以及单一因子对照组比较,组3、组4的2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率无差异（P＞0.05）;囊胚率、孵化率以及囊胚细胞计数显著增加（P＜0.05）。而两组之间比较,组4的孵化率较组3明显提高（P＜0.05）。第二步:与空白对照组比较,组2（单一因子组）的2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率无差异（P＞0.05）;囊胚率、孵化率显著增加（P＜0.05）;囊胚细胞计数差异无显著性（P＞0.05）。与空白对照组及单一因子对照组比较,组3,组4,组5的2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率无差异（P＞0.05）。而三组之间比较,组4的囊胚率、孵化率以及囊胚细胞计数均显著增加（P＜0.05）。[结论]:（1）EGF浓度在1-10ng/ml范围内可以提高体外培养鼠胚的囊胚率及化率,而对囊胚细胞计数无影响。（2）EGF及IGF-Ⅱ对体外培养鼠胚的发育具有协同促进作用。（3）10ng/mlEGF联合10ng/mlIGF-Ⅱ为在小鼠体外培养中提高体外培养鼠胚的囊胚率及孵化率及囊胚细胞计数的最优组合。
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