绿豆中清热解毒成分的提取及稳定性的研究

论文摘要

以绿豆为原料,乙醇粗提,两相萃取。利用萃取物进行了抑菌、体内外清除内毒素实验、解热试验,并对萃取物的成分进行分离制备,对成分进行定性。采用乙醇冷凝回流萃取得到总提取物,通过显色基质鲎试验法证明绿豆提取液具有清除细菌内毒素的作用,并以内毒素清除率为指标确定最佳提取条件为70%乙醇,料液比1：20,温度60℃,提取时间2h；总提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取物经鲎试验证明正丁醇萃取物为有效萃取物,内毒素清除率为78.90%。抑菌实验。总提取物和正丁醇萃取物对枯草芽孢杆菌、白色葡萄球菌、大肠杆菌、青霉有不同的抑制作用,其中正丁醇萃取物抑菌活性最强,并确定正丁醇萃取物的最小抑菌浓度：大肠杆菌0.85mg/ml、枯草芽孢杆菌0.79 mg/ml、白色葡萄球菌0.59mg/ml、青霉35.32mg/ml。且抑菌活性在温度30℃～70℃,pH值7.0～8.0的条件下都具有较好的抑菌稳定性,不受紫外线照射的影响。清热解毒作用研究。气相色谱外标法测定正丁醇萃取物的正丁醇残留量0.0236%；浓度为10mg/ml、100mg/ml正丁醇萃取物,能显著降低小鼠的死亡率,延长生存时间,与内毒素组相比有极显著性的差异（P<0.01）；浓度为1mg/ml,与内毒素组比较有显著性差异（P<0.05）；对存活小鼠血清、肝脏、脑中SOD活力和MDA的含量进行测定。结果表明浓度为10mg/ml、100mg/ml正丁醇萃取物能极显著提高小鼠体内SOD活力,降低MDA的水平,与内毒素组比较（P<0.05）；浓度为1mg/ml时,能显著性降低MDA的水平（P<0.05）；同时对内毒素致热小鼠发热进行解热试验,给药1h后测定肛温,浓度为1.0%和0.6%时,与模型组比较呈现显著性差异（P<0.05）,给药2h后,0.2%的正丁醇萃取物较模型组也表现出显著性差异（P<0.05）。正丁醇萃取物的组分分离制备。薄层层析筛选出展开剂乙酸乙酯：正丁醇：水：醋酸=4：1：1：1时,分离5种组分；用乙酸乙酯：正丁醇=4：1、乙酸乙酯：正丁醇：醋酸=20：5：3进行硅胶柱梯度洗脱,分离出组分F01（产率20.12%）、F02（产率15.35%）；残留液过聚酰胺层析柱,60%乙醇进行洗脱,得到组分F03（产率12.56%）；残留液进一步用TLC制备得到F05（产率16.05%）；各组分经薄层层析确定各组分为单一组分,熔点为：正丁醇247.3～261.5、F01,259.8～265.9、F02,281.6～287.5、F03,284.1～291.3、F05,196.0～201.6。通过薄层染色反应,确定F02为黄酮；F04、F05是皂苷。稳定性试验。正丁醇萃取物极易潮解；温度对F01、F02、F04组分含量影响较大,当温度超过70℃,含量急剧下降,只有在温度50℃以下时,含量基本保持不变,F03在温度超过100℃时,才对其成分造成破坏,性状无变化；各组分不受紫外线照射影响,在pH值5.0-9.0范围内比较稳定。其中F01耐酸性较强。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 绿豆
• 1.1.1 绿豆简介
• 1.1.2 产地分布
• 1.1.3 绿豆的成分
• 1.1.4 绿豆的药理作用
• 1.1.5 绿豆的应用
• 1.2 清热解毒
• 1.2.1 清热解毒定义
• 1.2.2 清热解毒的研究方法
• 1.3 本课题来源及研究意义
• 1.4 论文研究内容
• 1.4.1 绿豆提取液的制备
• 1.4.2 绿豆正丁醇提取物抑菌作用研究
• 1.4.3 绿豆正丁醇提取物清热解毒作用研究
• 1.4.4 绿豆正丁醇萃取物化学成分分离纯化
• 1.4.5 清热解毒有效成分稳定性的研究
• 1.5 本章小结
• 2 绿豆提取液的制备
• 2.1 引言
• 2.2 实验仪器与材料
• 2.2.1 主要实验仪器
• 2.2.2 实验材料
• 2.3 实验方法与步骤
• 2.3.1 绿豆预处理
• 2.3.2 提取液的制备
• 2.3.3 工艺流程
• 2.3.4 鲎试验
• 2.3.5 不同的提取条件对提取效果的影响
• 2.3.6 不同溶剂萃取物对内毒素的清除作用
• 2.3.7 清除内毒素有效成分的初探
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 内毒素标准曲线的绘制
• 2.4.2 不同提取条件对提取效果的影响
• 2.4.3 不同溶剂萃取物对内毒素的清除作用
• 2.4.4 绿豆提取物成分的定性测定结果
• 2.5 本章小结
• 3 绿豆正丁醇萃取物抑菌作用研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验仪器与材料
• 3.2.1 仪器与设备
• 3.2.2 主要实验材料
• 3.3 实验方法及步骤
• 3.3.1 培养基的制备
• 3.3.2 菌悬液的制备
• 3.3.3 滤纸片法测定抑菌效果
• 3.3.4 绿豆提取物抑菌活性稳定性研究
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 不同萃取物的抑菌效果
• 3.4.2 不同浓度正丁醇萃取物对各个菌种的抑菌效果
• 3.4.3 正丁醇萃取物的MIC测定结果
• 3.4.4 正丁醇提取物抑菌稳定性试验
• 3.4.5 热处理对抑菌效果的影响
• 3.4.6 紫外线处理对抑菌效果的影响
• 3.4.7 pH值对抑菌效果的影响
• 3.5 本章小结
• 4 绿豆正丁醇萃取物清热解毒作用研究
• 4.1 前言
• 4.2 实验仪器与材料
• 4.2.1 主要实验仪器
• 4.2.2 主要实验材料
• 4.3 实验方法及步骤
• 4.3.1 气相色谱法测定正丁醇残留
• 4.3.2 正丁醇萃取物对对内毒素致小鼠死亡率的影响
• 4.3.3 内毒素致小鼠死亡中血清、肝脏、脑中中SOD活力的测定
• 4.3.4 内毒素致小鼠死亡中血清、肝脏、脑中中丙二醛（MDA）的测定
• 4.3.5 正丁醇萃取物对内毒素致小鼠发热的解热试验
• 4.3.6 数据处理及结果判定
• 4.4 实验结果与分析
• 4.4.1 气相色谱法测定正丁醇残留
• 4.4.2 正丁醇萃取物对对内毒素致小鼠死亡率的影响
• 4.4.3 内毒素致小鼠死亡中小鼠血清、肝脏、脑SOD活力的测定
• 4.4.4 内毒素致小鼠死亡中血清、肝脏、脑中丙二醛（MDA）的测定
• 4.4.5 正丁醇萃取物对内毒素致小鼠发热的解热试验
• 4.5 本章小结
• 5 绿豆正丁醇萃取物化学成分分离纯化
• 5.1 引言
• 5.1.1 柱层析
• 5.1.2 薄层色谱
• 5.2 实验仪器与材料
• 5.2.1 实验仪器
• 5.2.2 实验材料
• 5.3 实验内容
• 5.3.1 薄层层析分离正丁醇提取物的成分
• 5.3.2 纯化路线
• 5.3.3 硅胶柱层析分离正丁醇提取物的成分
• 5.3.4 聚酰胺柱层析分离正丁醇组分
• 5.3.5 TLC分离制备正丁醇组分
• 5.3.6 各组分的紫外扫描图谱
• 5.3.7 纯度的鉴定
• 5.3.8 各组分的薄层检识
• 5.4 结果与讨论
• 5.4.1 硅胶柱层析分离正丁醇提取物的成分
• 5.4.2 硅胶柱层析分离正丁醇提取物的成分
• 5.4.3 聚酰胺柱层析分离正丁醇组分
• 5.4.4 TLC分离制备正丁醇组分
• 5.4.5 各组分的紫外扫描图谱
• 5.4.6 纯度的测定
• 5.4.7 薄层检识
• 5.5 本章小结
• 6 清热解毒有效成分稳定性的研究
• 6.1 引言
• 6.2 实验仪器与材料
• 6.2.1 实验仪器
• 6.2.2 实验材料
• 6.3 实验方法与步骤
• 6.3.1 各组分标准曲线的测定
• 6.3.2 微生物限量的测定
• 6.3.3 各组分稳定性试验
• 6.4 实验结果与分析
• 6.4.1 各组分的标准曲线
• 6.4.2 湿度对稳定性的影响
• 6.4.3 温度对稳定性的影响
• 6.4.4 紫外线照射试验
• 6.4.5 pH试验
• 6.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢