梅鱼酶解多肽的分析及功能性研究

论文摘要

梅鱼作为海洋低值鱼类,是我省海洋捕捞的主要对象之一。梅鱼中蛋白含量高,目前这一蛋白资源尚未得到高值化或工业化利用。利用梅鱼蛋白酶解制备活性多肽,可充分利用这部分蛋白资源,提高其产品价值。本课题主要以梅鱼蛋白制备的多肽为原料,分析多肽的理化性质,利用电泳对酶解多肽的分子量和等电点进行了测定。并通过多种分离手段对酶解多肽进行了分离纯化,对多肽的血管紧张素转化酶抑制活性、抗氧化活性进行了研究。理化性质的研究结果表明:多肽的粗蛋白含量较高,粗脂肪含量相对偏低,仅为0.32%。梅鱼多肽具有良好的溶解性和高浓度下的低粘度特性。氨基酸组成分析表明,梅鱼多肽中的必需氨基酸含量丰富,总含量为47.41%。其中,赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸+胱氨酸及苯丙氨酸+酪氨酸的含量显著高于FAO/WHO参考模式的建议值。选用Sephadex G-10对多肽进行脱盐处理。之后分别采用SDS-PAGE、Tricine-SDS-PAGE以及等电聚焦电泳测定了梅鱼多肽的分子量和等电点。结果表明:较之SDS-PAGE,Tricine-SDS-PAGE对小分子和复杂体系的分离效果较为理想;凝胶总浓度为16.5%、交联度为5%的Tricine-SDS-PAGE系统分析酶解多肽的成分主要是分子量小于14.4 kDa的多肽;梅鱼多肽主要由等电点小于7的酸性多肽组成。采用超滤、凝胶色谱、离子交换柱层析对梅鱼多肽进行分离,并在分离每步测定各组分的ACE抑制活性。梅鱼多肽最初的ACE半抑制浓度为0.203mg/ml。多肽经截留分子量为1000Da、5000Da、10000Da的膜超滤后,得到四个组分。其中组分I具有最大的ACE抑制活性,IC50为0.176mg/ml。组分I经Sephadex G-25凝胶色谱分为Ia、Ib、Ic、Id四个组分。其中组分Ia无ACE抑制活性,组分Id ACE抑制活性最高,IC50为0.088mg/ml。组分Id经DEAE阴离子交换柱进一步分为两个组分,即Id（1）和Id（2）,其IC50分别为0.084mg/ml和0.080mg/ml。此外,还对梅鱼多肽的进行了体外抗氧化研究。结果表明,多肽对DPPH有明显的清除作用,并呈现良好的量效关系。烷基自由基氧化体系中,MDA半数抑制浓度为9.8mg/mL。脂质过氧化体系中,多肽对亚油酸氧化有明显的抑制作用。羟基和超氧阴离子氧化体系中,呈负清除作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 1.1 我国水产品加工现状
• 1.2 水产品加工发展趋向
• 1.3 生物活性肽的研究
• 1.3.1 生物活性肽基本概念
• 1.3.2 生物活性肽吸收机制
• 1.3.3 生物活性肽生理活性
• 1.4 研究目的及研究内容
• 1.4.1 研究目的及意义
• 1.4.2 研究内容
• 第2章 梅鱼多肽的理化性质分析
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 水分测定
• 2.2.2 灰分测定
• 2.2.3 粗脂肪测定
• 2.2.4 粗蛋白质测定
• 2.2.5 表面粘度的测定
• 2.2.6 溶解度分析
• 2.2.7 梅鱼多肽氨基酸组成测定
• 2.2.8 蛋白质分析方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 梅鱼多肽的一般营养成分分析
• 2.3.2 表面粘度分析
• 2.3.3 溶解度分析
• 2.3.4 梅鱼多肽的氨基酸组成
• 2.3.5 梅鱼多肽的营养评价
• 2.4 小结
• 第3章 梅鱼多肽的电泳分析
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 仪器及材料
• 3.1.2 试剂配制
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 SDS-PAGE电泳
• 3.2.2 Tricine-SDS-PAGE电泳
• 3.2.3 等电聚焦电泳
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 梅鱼蛋白酶解多肽的脱盐结果
• 3.3.2 电泳方法对梅鱼多肽的分离效果
• 3.3.3 等电聚焦电泳结果的分析
• 3.4 小结
• 第4章 梅鱼多肽的分离及ACE体外抑制活性的研究
• 4.1 试剂与仪器
• 4.1.1 仪器
• 4.1.2 试剂
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性的测定
• 4.2.2 ACEI分离纯化及ACE抑制活性
• 4.2.3 样品分子量分布的测定
• 4.2.4 实验数据处理
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 ACEI体外抑制活性测定
• 4.3.2 不同分子量段ACEI抑制活性
• 4.3.3 凝胶过滤层析及ACE抑制活性的测定
• 4.3.4 离子交换层析及ACE抑制活性的测定
• 4.4 小结
• 第5章 梅鱼多肽体外自由基清除能力的研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 仪器及材料
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 DPPH自由基体系
• 5.2.2 羟基自由基体系
• 5.2.3 烷基自由基引发的亚油酸氧化体系
• 5.2.4 超氧阴离子自由基体系
• 5.2.5 体外脂质过氧化抑制活性的研究
• 5.2.6 实验数据处理
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 在DPPH自由基体系中对自由基清除效果
• 5.3.2 在羟基自由基体系中对自由基清除作用
• 5.3.3 在烷基自由基引发的亚油酸氧化体系中的清除作用
• 5.3.4 在超氧阴离子自由基体系中的清除作用
• 5.3.5 体外脂质过氧化抑制活性
• 5.4 小结
• 第6章 结论
• 参考文献
• 致谢