地黄内生菌的分离鉴定和产梓醇菌株的筛选及其发酵研究

论文摘要

从内生菌中寻找产抗菌抗癌药物以及其它生物活性物质的菌株是目前国内研究的一热门课题。本文本文以地黄植株为材料进行内生菌的分离鉴定,并试图从内生菌中选出产地黄药效成分-梓醇的菌株,取得以下五方面成果:1)分离到38株地黄内生菌,30株细菌,8株真菌,未分离到放线菌;其中细菌以假单胞菌属和芽孢杆菌属为主。2)地黄植株中的内生菌生态分布较均一,以细菌为主,其次是真菌,且根茎叶中内生菌种类基本相同。3)筛选到一株在适宜条件下可以产地黄主要药效成分-梓醇,并鉴定为枯草芽孢杆菌。4)生物活性物质-梓醇的分离纯化鉴定:将发酵液加醋酸铅和氯化钠除蛋白和多糖后冷冻干燥至糊状,用95%乙醇超声萃取得上清液,上清液浓缩至糊状用20%乙醇溶解过滤取滤液,滤液过大孔吸附树脂,收集含有梓醇的收集液并浓缩至一定体积,用高效液相色谱和质谱鉴定分离纯化到的生物活性物质-梓醇。5)研究了tjD7的培养特性:发现在淀粉5g/L,牛肉膏15g/L,K+2.5g/L,pH7.48,温度36.08℃,接种量2.76%的条件下培养2.80天,产梓醇量达到最大,可高达44.7219μg/mL。综上所述,从怀地黄中分离植物内生菌,并对内生菌产生物活性物质进行研究,为获得新菌种提供一种新思路。而且通过内生菌的发酵代谢产生坏地黄药效成分和地黄多糖等活性物质,既可以用在相关药物领域中的有效成分的添加也可以部分替代地黄的种植,减少季节性供应的限制,提高产量,大大降低生产成本。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 第一章 文献综述
• 1 植物内生菌
• 1.1 植物内生菌概念、种类及其特点
• 1.2 植物内生菌与其寄主的相互关系
• 1.3 植物内生菌国内外的研究进展
• 2 中药材内生菌
• 2.1 中药材内生菌分布特点、生长特性及其与寄主药效成分研究
• 2.2 中药材内生菌的研究进展
• 3 地黄
• 3.1 地黄组成及其药效作用的研究
• 3.2 梓醇的研究
• 4 菌种鉴定研究
• 4.1 细菌分类系统和伯杰氏手册
• 4.2 细菌的分类鉴定方法
• 第二章 引言
• 第三章 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 试验植株
• 1.2 试验菌种
• 1.3 试验所用的主要试剂
• 1.4 试验所用主要仪器
• 2 方法
• 2.1 培养基配制
• 2.2 溶液配制
• 2.3 表面消毒和组织切割法分离内生菌
• 2.4 菌株纯化和形态观察
• 2.5 生理生化鉴定
• 2.6 产梓醇菌株的筛选
• 2.7 tjD7 菌株的特性研究
• 2.8 正交试验法优化tjD7 菌株的发酵培养基成分
• 2.9 tjD7 菌株发酵条件的优化
• 第四章 结果与分析
• 1 地黄内生菌的分离
• 2 VITEK 系统微生物鉴定
• 3 产梓醇菌株的筛选
• 3.1 薄层层析法筛选产梓醇菌株
• 3.2 高效液相色谱和质谱法鉴定tjD7 发酵液中的梓醇
• 4 tjD7 菌株的特性研究
• 4.1 tjD7 菌株的菌落特征和革兰氏染色结果
• 4.2 tjD7 菌株最适生长温度
• 4.3 tjD7 菌株的最适pH 值
• 4.4 tjD7 菌种的生长曲线
• 4.5 tjD7 菌株的 16S rDNA 鉴定
• 4.6 正交试验法优化tjD7 菌株的发酵培养基
• 5 tjD7 菌株发酵条件的优化
• 第五章 结论与讨论
• 1 结果
• 2 讨论
• 参考文献
• 英文摘要