茯苓皮中三萜的提取、分离纯化及其活性研究

论文摘要

茯苓作为“药食同源”特性的传统中药资源之一,具有显著的生物活性及药理作用。在茯苓加工过程中,茯苓皮当成废料处理,造成了茯苓资源的极大浪费;为了提高茯苓加工利用率,提高资源的附加值,进一步探明茯苓中的活性成分,本文以茯苓皮为研究对象,采用现代分离技术对茯苓皮中的三萜类物质进行了提取、分离、纯化与鉴定;并且测定了三萜物质提取物抑菌、抗炎、抗氧化及抑制酪氨酸酶酶活等方面的生物活性。主要研究结果如下:1茯苓皮三萜提取、含量测定及其定性分析:以湖北大别山区九资河茯苓的皮为原料,采用香草醛-冰乙酸-高氯酸显色法测定出茯苓皮中总三萜的含量为1.59%。采用有机溶剂甲醇提取茯苓皮中的三萜,通过单因素试验和四元二次旋转正交试验确定了最佳提取条件为:提取时间6h,温度为70℃,料液比1:20,提取次数为2次,且提取率可达到95.2%,而样品纯度可达到78.5%。化学定性反应、紫外扫描吸收光谱和红外光谱特征吸收表明茯苓皮甲醇提取物中含有三萜类物质。高效液相色谱与质谱联用推断出茯苓皮三萜粗提物中18种三萜成分。2茯苓皮三萜的分离、纯化、制备及鉴定:采用硅胶柱层析分离法分离茯苓皮三萜粗提物得到不同级分的组分,应用化学显色反应、紫外光谱、红外光谱、高效液相色谱等方法对分离得到的组分进行鉴定。实验结果表明,3种纯化组分虽然各是几个单一三萜成分的混合物,但较粗提物已具备一定纯度,而且结合紫外光谱、红外光谱、高效液相色谱等鉴定方法的分析结果可初步推断每种纯化组分中所含的单一三萜成分。3茯苓皮三萜的美白皮肤活性:采用生长速率法的抑菌实验表明:茯苓皮中粗三萜及其纯化组分对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌都有较好且较稳定的抑制作用;小鼠二甲苯耳廓致炎实验表明茯苓皮粗三萜有较好的抗炎活性;体外抗氧化实验则显示茯苓皮粗三萜及其纯化组分也都有较好的抗氧化活性,其中茯苓粗三萜及其纯化组分都能有效清除超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢3种氧自由基,在红细胞自氧化及H2O2诱导的氧化溶血体系中,茯苓皮粗三萜及其纯化组分都能对红细胞溶血起到一定的抑制作用,而在抗小鼠肝脂质过氧化体系中,茯苓皮粗三萜及其纯化组分对肝脂质自发性过氧化和Fe-H2O2诱导的过氧化产生的丙二醛（MDA）都有较好的清除效果;抑制酪氨酸酶酶活实验则显示,茯苓皮粗三萜及其纯化组分对酪氨酸酶活的抑制属于双向作用,低浓度时有较好的抑酶活性,高浓度时反而对酪氨酸酶酶促反应有促进作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1 茯苓及茯苓皮概述
• 2 三萜概述
• 3 茯苓三萜概述
• 3.1 茯苓三萜的化学成分研究进展
• 3.1.1 茯苓三萜的化学成分及结构特点
• 3.1.2 茯苓三萜的提取和分离纯化
• 3.1.3 茯苓三萜的结构鉴定
• 3.1.4 茯苓三萜成分的构效关系
• 3.2 茯苓三萜的药理作用和生物活性研究进展
• 3.2.1 抗肿瘤作用
• 3.2.2 抗炎作用
• 3.2.3 对免疫功能的影响
• 3.2.4 止吐作用
• 3.2.5 胰岛素作用增强活性
• 3.2.6 利尿作用
• 3.2.7 其它作用
• 4 本课题研究的目的与意义
• 第二章 茯苓皮三萜的提取、含量测定及成分的化学分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器设备
• 1.4 方法
• 1.4.1 总三萜含量的测定
• 1.4.2 茯苓皮三萜的提取
• 2.结果与分析
• 2.1 茯苓皮中三萜最佳提取条件的单因素实验
• 2.1.1 有机溶剂种类对茯苓皮中三萜提取效果的影响
• 2.1.2 料液比对茯苓皮中三萜提取效果的影响
• 2.1.3 提取温度对茯苓皮中三萜提取效果的影响
• 2.1.4 提取时间对茯苓皮中三萜提取效果的影响
• 2.1.5 提取次数对茯苓皮中三萜提取效果的影响
• 2.2 旋转正交实验确定茯苓皮三萜最适提取工艺
• 2.2.1 旋转组合实验及结果
• 2.2.2 建立拟合模型
• 2.2.3 响应面分析
• 2.2.4 验证实验结果
• 2.3 茯苓皮三萜粗提物定性与定量分析
• 2.3.1 茯苓皮三萜的化学定性
• 2.3.2 茯苓皮中总三萜含量的确定
• 2.3.2.1 三萜含量的确定
• 2.3.2.2 稳定性实验结果
• 2.3.2.3 精密度实验结果
• 2.3.2.4 回收率实验结果
• 3 结论
• 4 讨论
• 第三章 茯苓皮中三萜类物质的分离鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器设备
• 1.4 实验方法
• 1.4.1 茯苓皮三萜的分离纯化
• 1.4.2 三萜含量的测定
• 1.4.3 茯苓皮三萜纯化组分的结构表征
• 1.4.3.1 化学反应鉴定
• 1.4.3.2 紫外光谱分析
• 1.4.3.3 红外光谱分析
• 2 结果与分析
• 2.1 硅胶柱层析分离纯化茯苓皮三萜类化合物
• 2.2 硅胶柱分离产物的制备
• 2.3 茯苓皮中三萜类物质的结构鉴定
• 2.3.1 样品1的结构鉴定
• 2.3.2 样品2的结构鉴定
• 2.3.3 样品3的结构鉴定
• 3 结论
• 4 讨论
• 第四章 茯苓皮三萜对皮肤美白生物活性的基础性研究
• 1.材料与方法
• 1.1 材料试剂
• 1.1.1 材料
• 1.1.2 试剂
• 1.2 仪器
• 1.3 方法
• 1.3.1 茯苓皮三萜及其纯化组分的抑菌活性研究
• 1.3.1.1 菌种活化培养
• 1.3.1.2 样品液的制备
• 1.3.1.3 抑菌活性测定
• 1.3.1.4 最小抑菌浓度（MIC）测定
• 1.3.1.5 样品抑菌稳定性研究
• 1.3.2 茯苓皮粗三萜抗炎活性的研究
• 1.3.3 茯苓皮粗三萜及其纯化组分的体外抗氧化活性研究
• 1.3.3.1.样品液的制备
• 1.3.3.2 化学发光法测定茯苓皮三萜及其纯化组分清除自由基的活性
• 1.3.3.3 茯苓皮三萜及其纯化组分抗红细胞氧化溶血作用
• 1 3.3.4 茯苓皮三萜及其纯化组分对肝脂质过氧化的抑制作用
• 1.3.4 茯苓皮三萜及其纯化组分抑制酪氨酸酶活性的研究
• 1.3.4.1 样品液的制备
• 1.3.4.2 抑制酪氨酸酶酶活试验设计
• 2 结果与分析
• 2.1 茯苓皮三萜的抑菌效果分析
• 2.1.1 茯苓皮粗三萜的抑菌效果分析
• 2.1.2 茯苓皮三萜萃取物的抑菌效果分析
• 2.1.3 茯苓皮三萜纯化组分的抑菌效果分析
• 2.1.3.1 茯苓皮三萜纯化组分的抑菌效果分析
• 2.1.3.2 茯苓皮三萜3种纯化组分对3种受试菌的抑制效果比较
• 2.2 茯苓皮粗三萜的抗炎效果分析
• 2.3 茯苓皮三萜体外抗氧化活性评价
• 2.3.1 茯苓皮粗三萜体外抗氧化活性评价
• 2.3.1.1 邻苯三酚-碳酸盐缓冲溶液-鲁米诺发光体系评价茯苓皮三萜清除超氧阴离子自由基的作用
• 2.3.1.2 邻菲啰琳-硫酸铜-抗坏血酸-双氧水发光体系评价茯苓皮三萜清除羟基自由基的作用
• 2.3.2 茯苓皮三萜萃取物及其纯化组分的体外抗氧化活性评价
• 2.4 茯苓皮三萜抑制酪氨酸酶活性分析
• 2.4.1 茯苓皮粗三萜抑制酪氨酸酶活性分析
• 2.4.2 茯苓皮三萜萃取物抑制酪氨酸酶活性分析
• 2.4.3 茯苓皮三萜纯化组分抑制酪氨酸酶活性分析
• 3 结论
• 4 讨论
• 参考文献
• 发表论文情况
• 致谢