桑提取物对酪氨酸酶的抑制作用研究

论文摘要

在人和动植物体内,黑色素的生物合成都是发生在含有酪氨酸酶的一系列黑色素细胞中。酪氨酸酶是黑色素生物合成中必不可少的关键酶,黑色素细胞中的酪氨酸在酪氨酸酶的催化下最终形成黑色素。因此寻找高效的酪氨酸酶抑制剂已成为化妆品行业关注的热点。本文主要以桑类植物提取物对酪氨酸酶的抑制作用为评价指标,追踪和分离桑类植物中最有效的酪氨酸酶抑制剂。以桑叶和桑白皮为提取对象,比较提取产物对酪氨酸酶的抑制作用,筛选最佳的抑制酪氨酸酶的活性部位。结果表明桑白皮提取物对酪氨酸酶的抑制效果普遍要比桑叶提取物好,确定桑白皮作为最佳活性部位。在此基础上,考察不同极性的提取溶剂对提取物抑制酪氨酸酶活性的影响,通过对抑制率和提取产率两个指标综合考虑,确定乙醇为最佳提取溶剂。以乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制率和提取产率为评价指标,考察桑白皮提取工艺对提取物抑制酪氨酸酶活性的影响。分别探讨了提取溶剂乙醇的浓度、提取时间、提取温度和pH对浸膏得率和抑制率的影响,在此基础上设计了4因素3水平的正交实验,实验结果经过方差分析,表明影响酪氨酸酶抑制率的主要因素是提取温度,而影响产率的主要因素是乙醇的浓度。正交实验得到桑白皮酪氨酸酶抑制剂的最佳提取工艺：桑白皮用浓度为55%的乙醇在60℃回流提取2次,每次2小时,pH值为6.8。以此提取工艺重复提取,提取物对酪氨酸酶的平均抑制率为72.92%,平均得率为27.90%。采用层析分离的方法,对桑白皮中抑制酪氨酸酶的活性物进行了跟踪分离。采用制备高效液相色谱对活性物质进行了纯化精制,最后通过红外光谱、紫外光谱、核磁共振光谱和质谱等波谱分析,对分离得到的活性物进行了结构鉴定,确定该化合物为桑根酮C,其对酪氨酸酶的抑制率为96.23%,活性优于传统的酪氨酸酶抑制剂熊果苷。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 酪氨酸酶与黑色素
• 1.1.1 酪氨酸酶结构的特点
• 1.1.2 黑色素的形成
• 1.2 酪氨酸酶抑制剂的研究进展
• 1.2.1 酪氨酸酶的抑制类型和抑制机理
• 1.2.2 单味中药对酪氨酸酶的抑制作用
• 1.2.3 天然产物中单体物质对酪氨酸酶的抑制作用
• 1.2.4 美白化妆品发展趋势
• 1.3 桑属植物的成分分析和生物活性
• 1.3.1 桑属植物的化学成分分析
• 1.3.1.1 酚性成分
• 1.3.1.2 生物碱及其甙
• 1.3.1.3 其他类型的化合物
• 1.3.1.4 酚性成分及生物碱的谱学特征
• 1.3.2 桑属植物的生物活性
• 1.4 桑属植物对酪氨酸酶的抑制作用
• 1.5 课题研究意义及研究内容
• 1.5.1 课题研究意义
• 1.5.2 课题的主要研究内容
• 第二章 桑属植物抑制酪氨酸酶活性部位及极性的筛选
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.1.1 实验材料与试剂
• 2.1.2 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 桑叶、桑白皮提取方法
• 2.2.2 不同极性溶剂的分步提取
• 2.2.3 酪氨酸酶抑制活性的测定方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 不同部位提取物对酪氨酸酶抑制活性的影响
• 2.3.2 不同极性溶剂的分步提取对抑制酪氨酸酶活性的影响
• 2.4 本章小结
• 第三章 桑白皮提取工艺对酪氨酸酶抑制活性的影响
• 3.1 实验材料和仪器
• 3.1.1 实验材料与试剂
• 3.1.2 实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 单因素试验
• 3.2.2 正交实验设计
• 3.2.3 提取工艺的验证实验
• 3.2.4 酪氨酸酶抑制活性的测定方法
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 乙醇提取浓度对酪氨酸酶抑制活性的影响
• 3.3.2 提取时间对酪氨酸酶活性的影响
• 3.3.3 提取温度对酪氨酸酶抑制活性的影响
• 3.3.4 pH对酪氨酸酶抑制活性的影响
• 3.3.5 正交实验
• 3.3.6 提取工艺的验证结果
• 3.4 本章小结
• 第四章 桑白皮中酪氨酸酶抑制剂的分离
• 4.1 实验材料和仪器
• 4.1.1 实验材料与试剂
• 4.1.2 实验仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 硅胶柱层析分离
• 4.2.2 HPLC分析
• 4.2.3 酪氨酸酶抑制活性的测定方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 上柱条件的确定
• 4.3.2 硅胶柱层析分离及其分离物对酪氨酸酶抑制率的测定
• 4.3.3 HPLC分析条件的确定
• 4.4 本章小结
• 第五章 高效酪氨酸酶抑制剂的精制和化学结构鉴定
• 5.1 实验材料和仪器
• 5.1.1 实验材料与试剂
• 5.1.2 实验仪器
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 制备高效液相色谱纯化
• 5.2.2 质谱分析
• 5.2.3 红外光谱分析
• 5.2.4 紫外光谱分析
• 5.2.5 核磁共振分析
• 5.2.6 不同样品对酪氨酸酶抑制活性的测定
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 制备高效液相色谱纯化
• 5.3.2 质谱分析结果
• 5.3.3 红外光谱分析结果
• 5.3.4 紫外光谱分析结果
• 5.3.5 核磁共振分析结果
• 5.3.6 不同样品对酪氨酸酶抑制活性的比对
• 5.4 本章小结
• 第六章 结论与建议
• 6.1 结论
• 6.2 建议
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间的成果
• 作者和导师简介
• 附件