PRRSV病毒分离及其ORF5基因序列分析

论文摘要

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起猪的一种新型传染病。该病自1987年首次在美国发现以来,迅速遍及世界各地,它所引发的“流产风暴”使养猪业蒙受了灾难性的经济损失。本研究采集PRRS疑似病料142份,在猪肺泡巨嗜细胞上进行病毒分离,成功分离到15株毒株。根据GeneBank中PRRSV美洲毒株（VR 2332）基因序列设计合成了针对ORF5基因（含部分ORF4和ORF6基因）的引物,利用RT-PCR方法从15株美洲型分离毒株细胞培养物中扩增出大小约760bp片段,克隆入pMD18- T载体后,送往宝生物工程技术有限公司测序。应用DNAStar软件对所测基因的序列与国内外已发表毒株的序列进行同源性比较,构建基因进化树,并对其推导氨基酸序列及GP5蛋白的一些特性与国内外已发表毒株进行比较。分析结果表明15株分离毒株与PRRS美洲型毒株亲缘关系较近,推导氨基酸序列同源性为88.9%-99.8%,并且15株分离株位于遗传进化树的同一分支上,推测它们源于同一个毒株。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展
• 1.1.1 病毒的分类地位
• 1.1.2 病毒的生物学特性
• 1.1.3 病毒的理化特性
• 1.1.4 病毒基因组的结构与特点
• 1.2 病毒的免疫学特性
• 1.2.1 T 淋巴细胞与免疫相关细胞
• 1.2.2 细胞因子与化学因子
• 1.2.3 体液免疫
• 1.2.4 细胞免疫
• 1.3 发病机制
• 1.4 临床症状
• 1.5 病理变化
• 1.5.1 临床病理变化
• 1.5.2 组织病理学变化
• 1.6 诊断与防治
• 1.6.1 诊断
• 1.6.2 防制
• 1.7 本研究的目的、意义及技术路线
• 2 实验材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要试验仪器
• 2.1.2 主要试剂和耗材
• 2.1.3 阳性对照病毒株
• 2.1.4 细胞
• 2.2 方法
• 2.2.1 病料的采集与处理
• 2.2.2 病毒分离
• 2.2.3 病毒 RNA 的提取
• 2.2.4 PRRSV ORF5 基因的克隆及序列分析
• 3 结果
• 3.1 RT-PCR 检测结果
• 3.2 细胞病变
• 3.3 分离病毒 RT-PCR 扩增
• 3.4 重组质粒酶切鉴定
• 3.5 本研究分离毒株与其它PRRS 毒株ORF5 基因序列比较
• 3.5.1 核苷酸序列分析
• 3.5.2 氨基酸序列比较
• 3.5.3 同源性分析
• 3.5.4 遗传进化树分析
• 3.5.5 15 株分离毒株 GP5 蛋白的一些特性分析
• 3.5.6 15 株分离毒株 GP5 蛋白抗原性变异分析
• 4 讨论
• 4.1 病毒分离结果
• 4.2 RT-PCR 检测结果
• 4.3 ORF5 序列比较
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介