MDV CVI988弱毒疫苗株VP22蛋白转导功能研究

论文摘要

血清I型马立克氏病病毒（Marek’s disease virus serotype 1,MDV-1）的UL49h基因与I型单纯疱疹病毒（HSV-1）UL49同源,编码病毒被膜蛋白VP22,分子量约27.6kD,是病毒被膜的主要成分。现已证实,MDV-1 VP22对病毒的复制和传播有着非常重要的作用。Dorange等发现MDV-1 VP22具有与HSV-1相似的蛋白转导功能。Hung等研究发现MDV-1 VP22能增强人16型乳头状瘤病毒（HPV-16）E7抗原融合表达的免疫效果,主要产生CD8+ T细胞介导的细胞免疫应答。本研究利用无致病性的CVI988/Rispens疫苗株扩增VP22基因,结果发现其C端缺失6个氨基酸,即201TKSERT206,对CVI988 VP22蛋白转导功能的研究结果提示:CVI988 VP22可作为一种高效便捷的蛋白转运工具,对于弥补DNA免疫缺陷和提高治疗性物质的转导效率具有非常重要的意义。1不同致病型马立克氏病病毒VP22蛋白的序列比较和分析用MDV-1 CVI988/Rispens株、GA株、RB1B株和648A株,MDV-2 Z4株和FC126株分别感染鸭胚成纤维细胞或鸡胚成纤维细胞,待出现大量空斑时,提取总DNA。根据已发表的MDV GA株VP22序列设计引物,成功扩增出MDV-1不同毒株的VP22基因。将PCR产物克隆T载体并测序分析,结果发现:强毒株GA株、超强毒RB1B株和特超强毒648A株的VP22长度保持750bp,但CVI988弱毒株的VP22基因C端缺失18bp,即存在一个6氨基酸残基的缺失性突变:201TKSERT206。2 CVI988弱毒疫苗株VP22羧基端原核表达及特异性抗体的制备设计特异性引物,扩增全长VP22、CVI988 VP22的羧基端区域（VP22C:aa94243）、VP22末端区（VP22T:aa207249）、缺失N端的VP22（VP22H:aa19243）。将BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切PCR产物,克隆入pGEX-6P-1载体中,转化BL21（DE3）细菌,经IPTG诱导表达,结果发现:VP22C获得了高效可溶性表达。SDS-PAGE分离阳性条带,采用切胶免疫或用诱导后的细菌经超声波裂解的

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一篇 文献综述部分
• 综述一 α疱疹病毒的被膜蛋白
• 1 概述
• 2 主要被膜蛋白及其功能
• 3 被膜蛋白的相互关系
• 4 被膜蛋白参与病毒的复制和传播
• 5 被膜蛋白功能研究的战略意义
• 综述二 疱疹病毒VP22蛋白转导功能及其应用
• 1 蛋白转导域的概念
• 2 VP22 的蛋白转导功能
• 3 VP22 的应用前景和存在的问题
• 第二篇 研究内容部分
• 第一章 不同致病型马立克氏病病毒VP22 蛋白的序列比较和分析
• 1 材料与方法
• 2 结果和分析
• 第二章 CV1988 弱毒疫苗株VP22 羧基端原核表达及特异性抗体的制备
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第三章 MDV-1 VP22 在真核系统中的表达和鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第四章 CV1988 VP22 蛋白转导功能的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第五章 CV1988 VP22 转导一些蛋白的初步鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第六章 CV1988 VP22增强IBDV VP2基因免疫效果的评价
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 附录
• 致谢
• 发表的学术论文及著作目录