论文题目: 利用siRNA抑制NF-κB p65蛋白的表达对Ⅱ型血管内皮细胞激活的影响的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 胸心血管外科
作者: 周晓彤
导师: 沈振亚
关键词: 延迟性排斥反应,血管内皮细胞,小干扰,干扰,核因子
文献来源: 苏州大学
发表年度: 2005
论文摘要: 背景: 器官移植现在已经成为治疗终末期器官功能衰竭的有效手段,为缓解临床同种供体的不足,异种器官作为最可能的供体来源越来越受到重视。然而,异种器官移植作为远缘移植,其面临的排斥反应较同种移植更为强烈、复杂。目前,异种移植面临的主要障碍是延迟性排斥反应,在这一过程中,由诱生抗体诱导的移植物Ⅱ型血管内皮细胞激活是异种移植物功能丧失的关键。本课题利用RNA 干扰(RNAi)技术特异性的抑制血管内皮细胞中核因子κB(NF-κB)的表达,研究小干扰RNA(siRNA)对异种移植延迟性排斥反应中Ⅱ型血管内皮细胞激活的抑制作用,探讨RNA 干扰技术在异种器官移植中的应用前景。方法: 1.将昆明小鼠(体重20-25g)颈椎脱臼处死,无菌状态下完整取出其胸、腹主动脉,利用植块法在含有20%胎牛血清的DMEM 培养液中进行小鼠动脉血管内皮细胞的原代和传代培养。倒置相差显微镜下观察内皮细胞的形态和生长特性,进行血管内皮细胞中Ⅷ因子相关抗原的检测鉴定。2.设计并体外化学合成小鼠NF-κB p65 的siRNA;同时筛选对小鼠血管内皮细胞(EOMA)有较高转染效率的转染试剂,并进一步优化该转染试剂在转染小鼠NF-κB p65 的siRNA 时的转染条件。3.将EOMA 细胞分为四组:(1)空白对照组(细胞内不加任何干扰因素);(2)阴性对照组(脂质体不携带siRNA);(3)NF-κB siRNA 组(细胞转染NF-κB siRNA);(4)scramble siRNA 组(细胞转染scramble siRNA)。于转染前一天,在24 孔板中接种EOMA 细胞,共12 孔,加入不含抗生素的适量的DMEM 培养液(含10%的FBS),转染时细胞的汇合度要达到50-70%。分别在转染后的24h、48h、72h 时以及未转染时(0h)用TRIzol 法提取相应各组细胞总RNA,行RT-PCR 测定细胞内NF-κB p65 mRNA 水平;同时提取各组细胞总蛋白,行Western blot 测定各组细胞NF-κB p65 蛋白。
论文目录:
前言
第一部分 小鼠血管内皮细胞的培养、鉴定
一、材料
二、方法
三、结果
四、讨论
参考文献
第二部分 小鼠NF-κB p65 的siRNA 的设计、合成及EOMA 细胞转染条件的优化
一、三种转染试剂对EOMA 细胞转染效率及细胞毒性的比较研究
(一) 材料
(二) 方法
(三) 结果
(四) 讨论
参考文献
二、siRNA 的设计、合成
(一) 方法
(二) 讨论
参考文献
三、Lipofectamine~(TM)2000 转染siRNA 时转染条件的优化
(一) 材料
(二) 方法
(三) 结果
(四) 讨论
参考文献
第三部分 小鼠NF-κB p65 的siRNA 对EOMA 细胞NF-κB p65 表达的影响的研究
一、材料
二、方法
三、结果
四、讨论
参考文献
第四部分 小鼠NF-κB p65 的siRNA 对TNF 诱导的EOMA 细胞中NF-κB p65 表达的抑制作用的研究
一、材料
二、方法
三、结果
四、讨论
参考文献
第五部分 NF-κB p65 的siRNA 对NF-κB 下游靶基因表达的影响的研究
一、材料
二、方法
三、结果
四、讨论
参考文献
结论
缩略词表
综述
攻读学位期间出版或公开发表的论著、论文
致谢
发布时间: 2006-03-24
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