论文摘要
组织工程心脏瓣膜的体外构建首先要将种子细胞成功地种植到瓣膜支架上,细胞与材料的相互作用是组织工程研究的主要领域之一,细胞必须与材料黏附,才能进行迁移、分化和增殖。目前所使用的生物材料有人工合成材料和天然材料,大多属于生物“隋性”材料,不能为种子细胞的附着和生长提供良好的生物界面。为了使种子细胞快速、牢固地黏附到支架上,需对材料进行表面改性。常用的方法有表面修饰法、化学改性法、等离子体法等。支架表面固定蛋白质进行表面修饰是目前最为常用的方法,其中物理吸附是最简单、易行的方法。 细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)是由多种大分子成分形成的具有一定组织性的网络结构,主要包括胶原、蛋白多糖及非胶原糖蛋白。纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)是ECM中重要的糖蛋白,它具有同时与ECM中多种成分相结合的特点,并促进ECM其他成分的沉积,而且Fn分子中的某些结构域能识别细胞表面的整合素受体,并与之结合,所以Fn是细胞黏附的桥梁和纽带,在细胞的黏附过程中起着至关重要的作用。但天然Fn存在来源不足、有传染性隐患、可引起免疫反应等缺点,另外Fn是大分子糖蛋白,由2335个氨基酸组成,采用基因转染、蛋白表达的方法技术难度巨大,获取几乎是不可能的,从而限制了其在组织工程研究中的广泛应用。重组纤维连接蛋白羧基端细胞结合域(FnCTD64)由607个氨基酸构成,是Fn分子中靠近羧基端的细胞结合位点,Fn有四个细胞结合位点,FnCTD64中就含有三个,与Fn相比,它具有来源充足、无传染性、不引起免疫反应等特点。用FnCTD64预涂心瓣膜支架是否也能增强种子细胞的黏附力,目前国内外尚未见报道。为此,我们以96孔板和去细胞猪主动脉瓣叶作为载体,预涂Fn、BSA及本实验室表达、纯化的重组蛋白FnCTD64,然后种植BMSCs,观察预涂蛋白对细胞黏附的影响,以寻找增强细胞黏附力的有效方法。 主要方法: 1.重组纤维连接蛋白羧基端细胞结合域(FnCTD64)真核表达:抽提人胎脑总RNA,使用RT-PCR技术扩增获得FnCTD64基因序列,构建表达FnCTD64蛋白的重组腺病毒Ad.FnCTD64。重组腺病毒h转染293细胞后,通过离子交换和分子筛纯化细胞
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标签:骨髓基质干细胞论文; 预处理论文; 细胞黏附论文; 组织工程心脏瓣膜论文;