论文摘要
抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs）是一类具有广谱抗微生物活性的天然小肽类物质,是先天免疫系统中重要的非特异性免疫因子。Piscidin一词最初来源于Silphaduang等从杂交斑纹鲈（hybrid stripedbass,Morone.chrysops×M.saxatils）肥大细胞分离出的一种肽类抗菌素,随后的研究发现,从鲆鲽类获得的抗菌肽pleurocidin,杂交斑纹鲈的moronecidin,欧洲狼鲈（Dicentrarchus labrax）的dicentracin,斜带石斑鱼（Epinepheluscoioides）的epinecidin-1等,都具有和piscidin十分相似的氨基酸序列及其多肽结构和功能,为α-螺旋、带正电荷、两性亲和多肽,可以统称为piscidin。本论文以我国重要的海水经济养殖鱼类——赤点石斑鱼（Epinephelus akaara）和大黄鱼（Pseudosciaena crocea）为研究对象,克隆得到两种鱼类的piscidin类抗菌肽基因,并分析其氨基酸序列组成和次级结构特点,与piscidin家族其他成员进行多序列比对,并建立系统进化树,研究结果如下:1、通过RT-PCR、3’RACE、5’RACE和测序等分子生物学技术,从赤点石斑鱼的头肾和脾脏扩增出piscidin-like抗菌肽序列,并进行序列分析和蛋白特性预测,结果显示赤点石斑鱼piscidin为带正电荷的两亲性α-螺旋结构,成熟肽碳末端具有强阳离子四肽的RRRH结构,与斜带石斑鱼成熟肽碳末端一致,这种结构有利于提高与细菌胞膜的结合能力,与piscidins家族其他抗菌肽序列相似性为59%-79%,一致性为45%-75%,其氨基酸序列和次级结构符合piscidin抗菌肽家族的特征,表明从赤点石斑鱼头肾和脾组织克隆得到的piscidin-like抗菌肽基因是piscidin基因变体,属于piscidins家族的新成员。2、通过RT-PCR、3’RACE、5’RACE和测序等分子生物学技术,从大黄鱼的头肾和脾脏扩增出piscidin-like抗菌肽序列,并进行序列分析和蛋白特性预测,结果显示大黄鱼piscidin成熟肽为带正电荷的两亲性α-螺旋结构,成熟肽碳末端没有石斑鱼类的RRRH结构,正电荷值比赤点石斑鱼piscidin低,优势域碳末端也没有鲈鱼类的XQQ模块,与piscidins家族其他抗菌肽序列相似性50-77%,一致性41-70%,其氨基酸序列和次级结构符合piscidin抗菌肽家族的特征,表明从大黄鱼克隆得到的piscidin-like抗菌肽基因是piscidin基因变体,属于piscidins家族的新成员。3、利用CLUSTALW软件对piscidin家族抗菌肽进行多序列比对,验证了其具有高度序列同源性,说明生物体结构与功能的高度统一。利用MEGA 4.0软件绘制了Piscidin抗菌肽家族与其它鱼类抗菌肽家族的系统进化树,验证了从赤点石斑鱼和大黄鱼克隆得到的基因属于鱼类piscidin抗菌肽基因,且piscidin家族抗菌肽基因自成一簇,与鱼类hepcidin抗菌肽家族相互区分。
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相关论文文献
- [1].大黄鱼Piscidin-like抗菌肽基因部分cDNA的克隆与序列分析[J]. 厦门大学学报(自然科学版) 2008(04)