岩藻多糖酶产生菌的筛选及其酶学特性研究

论文摘要

低分子量岩藻多糖是一种独特的活性多糖,而由其降解得到的寡糖,由于粘度低,溶解性好等优点而比原生的岩藻多糖更有利用价值。本文从淡水及土壤中采样进行产岩藻糖酶菌株的筛选。经富集,初筛,复筛,得到20株产酶高活力的菌株。其中菌株HNT01活力最高,传10代后性质仍很稳定。经发酵条件优化后,HNT01酶活达到3.27U/mL。通过对该菌株个体形态,菌落形态及生理生化特征的分析,16srRNA检测,确定其为荧光假单胞菌（Pseudomona fluorescens）。经单因子试验,得出HNT01产酶的最佳条件为:海带粉2%、尿素2%、葡萄糖0.06%、磷酸氢二钾0.1%、pH7.0、250mL三角瓶装液量为100mL。30℃、160r/min下用此培养基培养HNT01 76小时,岩藻多糖酶酶活力达最高值通过研究岩藻多糖酶学性质,得出该酶具有较好的热稳定性和pH稳定性。在温度20-50℃,pH 5-7的范围内都能保持良好的活性。同时得到了酶与底物反应的最适温度50℃和最适pH值6.0。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 岩藻多糖及低分子量岩藻多糖
• 1.1.1 岩藻多糖
• 1.1.2 低分子量岩藻多糖
• 1.2 海带低分子量岩藻多糖的制备
• 1.2.1 海带岩藻多糖的制备
• 1.2.2 岩藻多糖的化学降解
• 1.2.3 岩藻多糖的酶法降解
• 1.3 岩藻多糖酶研究进展
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 菌样来源
• 3.2 主要试剂与仪器
• 3.2.1 主要试剂
• 3.2.2 主要仪器
• 3.3 培养基
• 3.4 海带岩藻多糖的制备
• 3.5 菌种筛选方法
• 3.5.1 初筛
• 3.5.2 复筛
• 3.6 酶活力测定方法
• 3.6.1 岩藻多糖酶活力测定方法
• 3.6.2 纤维素酶活力测定方法
• 3.6.3 木聚糖酶活力的测定方法
• 3.6.4 淀粉水解试验
• 3.7 菌株鉴定方法
• 3.7.1 菌体形态观察
• 3.7.2 菌体生理生化特征检测
• 3.7.3 16srRNA检测试验
• 3.8 水解产物的薄层层析方法
• 4 结果与分析
• 4.1 初筛
• 4.2 复筛
• 4.3 菌株鉴定
• 4.3.1 形态特征
• 4.3.2 培养特征
• 4.3.3 生理生化特征
• 4.3.4 16srRNA检测结果
• 4.3.5 菌株鉴定结果
• 4.4 HNTO1菌株的产酶条件优化
• 4.4.1 碳源对HNTO1菌株产酶的影响
• 4.4.2 碳源浓度对HNTO1产酶的影响
• 4.4.3 氮源对HNTO1菌株产酶的影响
• 4.4.4 氮源浓度对细菌产酶的影响
• 4.4.5 添加葡萄糖对HNTO1菌株产酶的影响
• 4.4.6 添加无机盐对HNTO1菌株产酶的影响
• 4.4.7 发酵起始pH值对HNTO1菌株产酶活力的影响
• 4.4.8 培养温度对HNTO1菌株产酶的影响
• 4.4.9 HNTO1菌株的产酶曲线
• 4.5 HNTO1岩藻多糖酶酶学性质
• 4.5.1 HNTO1酶系组成分析
• 4.5.2 温度对酶活力的影响
• 4.5.3 温度稳定性试验
• 4.5.4 pH值对酶活力的影响
• 4.5.5 pH稳定性试验
• 4.5.6 HNTO1酶水解产物分析
• 5 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.2 讨论
• 参考文献
• 英文摘要
• 6 附图
• 6.1 16srRNA测序结果
• 6.2 NCBI Blast结果