酿酒酵母PP2C类蛋白磷酸酯酶对线粒体ATP酶活性的调控

论文摘要

PP2C类蛋白磷酸酯酶家族是一类丝/苏氨酸蛋白磷酸酯酶,目前发现由七个成员组成,分别是Ptc1p、Ptc2p、Ptc3p、Ptc4p、Ptc5p、Ptc6p和Ptc7p,其中Ptc5p、Ptc6p和Ptc7p定位于线粒体内。文献报道在酿酒酵母线粒体中存在有80个不同的磷酸化位点[1],其中一部分位于线粒体内膜上的ATP合酶的组成亚基上,ATP合酶组成亚基的磷酸化状态影响到了ATP合酶分子的组装。为了研究PP2C类基因的缺失对细胞中线粒体ATP合酶的影响,我们分别研究了PP2C类基因缺失株的表型以及线粒体ATP酶活性,结果发现PTC1基因的缺失会导致线粒体ATP酶活性显著下降,并且在YPD和YPA平板上表现出明显的生长缺陷。而ptc1ptc5以及ptc1ptc7双缺失株的ATP酶活性有不同程度的提升,并且在平板上的生长情况也较ptc1单缺失株好,表明PTC1基因分别与PTC5和PTC7基因之间在调控线粒体ATP合酶活性上存在遗传互作。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 1.1 酵母及酿酒酵母简介
• 1.2 酵母作为模式生物的作用
• 1.3 PP2C类蛋白磷酸酯酶
• 1.4 ATP酶
• 1.5 酵母ATP酶活性研究进展
• 1.6 本论文的研究内容
• 第二章 实验材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验菌种
• 2.1.2 实验用主要仪器
• 2.1.3 实验用主要试剂
• 2.1.4 实验用主要培养基
• 2.1.5 实验用溶液及缓冲液的配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 酵母菌的活化、培养、传代及菌种保藏
• 2.2.2 倍比稀释法
• 2.2.3 线粒体粗提物的提取
• 2.2.4 蔗糖密度梯度离心
• 2.2.5 考马斯亮蓝法测定蛋白浓度
• 2.2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 2.2.7 Western blot
• 2.2.8 ATP酶的活性测定方法
• 第三章 线粒体ATP酶的活性测定
• 3.1 发酵型培养条件（YPD）下，线粒体中ATP酶的活性测定
• 3.1.1 线粒体蛋白中beta亚基的western blot检测
• 3.1.2 无机磷酸含量标准曲线的测定
• 3.1.3 发酵型培养条件下，单个PP2C类基因缺失细胞中线粒体ATP酶活性比较
• 3.1.4 PTC1、PTC5 和PTC7 三基因缺失细胞中线粒体ATP酶的活性
• 3.1.5 PTC1 和PTC7 双基因缺失细胞中线粒体ATP酶的活性
• 3.1.6 PTC7 与PTC1、PTC2、PTC3、PTC4、PTC5、PTC6 中任意一个基因共同缺失细胞中线粒体ATP酶活性
• 3.1.7 PTC1 和PTC5 双基因缺失细胞中线粒体ATP酶的活性
• 3.1.8 PTC5 和PTC6 双基因缺失细胞中线粒体ATP酶的活性
• 3.1.9 发酵培养条件下，PP2C类基因缺失细胞中线粒体ATP酶活性测定小结
• 3.2 非发酵型培养条件（YPA）下，线粒体中ATP酶的活性测定
• 3.2.1 线粒体中ATP酶的beta亚基的western blot检测
• 3.2.2 无机磷酸含量标准曲线的测定
• 3.2.3 非发酵条件下，单个PP2C类基因缺失细胞中线粒体ATP酶活性比较
• 3.2.4 PTC1、PTC5 和PTC7 三基因缺失细胞中线粒体ATP酶的活性
• 3.2.5 PTC1 和PTC7 双基因缺失株中线粒体ATP酶的活性
• 3.2.6 PTC7 与PTC1、PTC2、PTC3、PTC4、PTC5、PTC6 中任意一个基因共同缺失细胞中线粒体ATP酶活性的比较
• 3.2.7 PTC1 和PTC5 双基因缺失细胞中线粒体ATP酶的活性
• 3.2.8 PTC5 和PTC6 双基因缺失细胞中线粒体ATP酶的活性
• 3.2.9 非发酵培养条件下，PP2C类基因缺失细胞中线粒体ATP酶活性结果比较小结
• 3.3 本章小结
• 第四章 PP2C类蛋白磷酸酯酶缺失株的表型检测
• 4.1 PTC1、PTC5 和PTC7 单基因、双基因和三基因缺失株在YPD和YPA上的表型检测
• 4.2 PTC2、PTC3、PTC4 和PTC7 的单基因和双基因缺失株在YPD和YPA上的表型检测
• 4.3 PTC5、PTC6 和PTC7 的单基因、双基因和三基因缺失株在YPD和YPA上的表型检测
• 4.4 PP2C类磷酸酯酶缺失菌株的表型检测小结
• 第五章 论文总结
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 致谢