电针对急性脊髓损伤大鼠24h差异蛋白质组学及SOD含量变化的机理研究

论文摘要

急性脊髓损伤（Acute Spinal Cord Injury,ASCI）是威胁人类生命的主要损伤性疾病之一。其发病率、致残率、死亡率都很高,每年各国对本病的基础和临床研究均投入了大量的精力,但是其发病机制尚不清楚,仍处于探索阶段。对于急性脊髓损伤的临床治疗,目前还没有特效的方法。针刺作为治疗急性脊髓损伤的有效方法之一,以其独特性发挥了重要作用。本研究选用改进的Allen’s打击装置制造脊髓损伤大鼠模型,旨在应用适宜频率参数的电针治疗,探讨其改善急性脊髓损伤大鼠受损脊髓状态的分子机制。对损伤部位的脊髓组织进行SOD含量的检测;取损伤部位脊髓组织进行蛋白质组学分析,找出相关差异蛋白。探讨电针在该模型上产生疗效的可能的神经化学机制,并在蛋白质组学的角度上探讨其机制,并现将主要结果简述如下:1.损伤局部组织SOD含量:24h后对大鼠进行治疗,然后处死动物取出损伤段脊髓,测定SOD的浓度。发现（1）①与空白组比较:模型组和药物组含量下降,且有极显著性差异。②与空白组比较:电针组含量下降,有显著性差异。（2）与模型组比较:电针组和药物组无差异,但是有增加的趋势。2.对大鼠脊髓全蛋白质进行双向凝胶电泳,借助Mascot软件从中找出差异表达蛋白质点。应用基质辅助激光解吸电离串联质谱,对差异表达的蛋白质点进行鉴定。结果:成功发现个8蛋白质点,表达水平具有显著性差异变化。在已发现的蛋白点中,成功鉴定出7种蛋白质:①磷酸丙糖异构酶（triosephosphate isomerase）（TPI）②还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）-脱氢酶复合体Ⅰ-亚复合物10（subcomplex 10）③磷酸甘油酸变位酶（Phosphoglycerate mutase 1）④核苷二磷酸激酶（NDPK）⑤E2泛素连接酶（E2N）⑥神经丝亚单位（NF-M）⑦DJ-1蛋白。通过本动物实验可见,针刺对早期急性脊髓损伤具有一定的治疗效果。鉴定出的蛋白质可能通过细胞的能量代谢,蛋白质的合成和水解,自由基的产生和清除,及其神经细胞骨架重建等途径参与了ASCI的损伤及修复过程。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 主要缩略词表
• 第一部分 综述部分
• 综述一 自由基综述
• 1. 自由基概况
• 1.1 自由基的定义
• 1.2 自由基的产生
• 1.3 自由基的三个特点
• 1.4 自由基的双重作用
• 1.5 自由基对生命大分子的损害
• 1.6 自由基与神经系统疾病
• 1.7 对自由基的研究现状
• 2. 自由基与急性脊髓损伤
• 2.1 概况
• 2.2 氧化应激反应与急性脊髓损伤的中医辨证分型
• 3. 针刺的抗氧化研究
• 3.1 针刺对脑血管疾病的抗氧化作用
• 3.2 针刺对血管性痴呆的抗氧化作用
• 参考文献
• 综述二 蛋白质组学技术及其在神经系统疾病中的应用
• 1 蛋白质组学的概念
• 2 蛋白质组学的研究技术
• 2.1 蛋白质分离技术
• 2.2 蛋白质鉴定技术
• 2.3 蛋白质组学信息查询技术
• 2.4 在神经系统疾病中的应用
• 2.5 在神经病学应用时出现的问题
• 3. 结语
• 参考文献
• 第二部分 实验研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验动物及分组
• 1.2 造模
• 1.3 治疗
• 2. 电针对大鼠脊髓损伤后局部组织内SOD含量的研究
• 2.1 SOD的检测方法
• 2.2 数据处理方法
• 2.3 结果
• 3. 电针对大鼠脊髓损伤后局部组织内差异蛋白质组学的研究
• 3.1 仪器
• 3.2 试剂
• 3.3 全蛋白提取方法
• 3.4 大鼠脊髓样品的蛋白定量
• 3.5 2D电泳方法
• 3.6 银染图谱
• 3.7 考染的胶内酶切
• 3.8 凝胶图像采集与分析
• 3.9 差异表达蛋白质点的质谱鉴定
• 3.10 结果
• 第三部分 讨论
• 1. 电针对大鼠脊髓损伤后局部组织内SOD含量研究的讨论
• 2. 电针对大鼠脊髓损伤后局部组织内差异蛋白质研究的讨论
• 3. 探讨差异蛋白质与急性脊髓损伤中医辨证分型
• 3.1 差异蛋白点的变化与阳气暴脱证
• 3.2 差异蛋白点的变化与血瘀证
• 4. 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历