莱菔子多糖的分离纯化、生化鉴定及功能性质的初步研究

论文摘要

莱菔子作为药食同源植物材料,在我国有着悠久的使用历史和广泛的来源。莱菔子具有诸多保健功能,如抗菌、降压、祛痰镇咳平喘、增强消化道运动和抗肾上腺素的作用。目前,对莱菔子功能成分的研究主要在水溶性生物碱与莱菔子素,对其多糖成分的研究较少。本文对莱菔子（Semen Raphani）多糖的提取、分离纯化、理化性质、抑菌及保鲜作用等进行了较为系统的研究,为莱菔子的开发利用提供了科学依据,对充分利用我国中药资源具有重要意义。通过单因素实验与正交实验研究确定了莱菔子多糖热水浸提及微波辅助提取的最佳工艺参数分别为:料液比1:35,浸提温度75℃,热水浸提时间3h,浸出率为6.85%;微波功率540W,料液比1:30,微波处理10min,浸出率达5.63%。实验结果表明,微波辅助能明显缩短浸提时间,提高多糖浸出率。莱菔子多糖醇沉工艺的研究结果表明,浸提液加入4倍体积无水乙醇,醇沉4h,沉淀得率最大。分别采用Sevag法、三氯乙酸法和三氯乙酸-正丁醇法脱除莱菔子粗多糖中蛋白质,对3种脱蛋白方法的工艺进行研究,得到各自的最佳工艺参数,并进行比较。研究发现:莱菔子多糖宜采用三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白,最佳工艺参数:样液与三氯乙酸-正丁醇混合液体积比1:2,三氯乙酸与正丁醇体积比1:15,振荡时间30min,静置时间1h,蛋白脱除率达68.68%,多糖损失率仅为14.71%,具有较好的脱蛋白效果。对粉末活性炭与过氧化氢2种脱色方法的工艺研究结果表明:粉末活性炭有一定的脱色效果,但多糖损失较严重,莱菔子多糖采用H2O2脱色率明显高于粉末活性炭脱色。莱菔子粗多糖经脱蛋白、脱色、透析除杂,得到莱菔子多糖SRP。SRP经DEAE-纤维素柱层析,分别用磷酸盐缓冲液,NaCL溶液,NaOH溶液洗脱,收集磷酸盐洗脱的主要组分,记为SRPa。SRPa经Sephadex G-200凝胶柱层析,洗脱曲线呈单一峰,同时用醋酸纤维薄膜电泳进行纯度鉴定。实验结果表明SRPa是均一中性多糖。采用Sephadex G-200凝胶法和HPLC法测定SRPa分子量,结果分别为60228和59401。研究了莱菔子多糖SRP的抑菌及保鲜作用。MIC实验结果表明:莱菔子多糖SRP对黑曲霉抑制作用较明显,MIC为10g/L。莱菔子多糖作为涂膜保鲜剂试材,在常温（25±2℃）条件下能有效抑制苹果、樱桃番茄体内营养物质的消耗,降低失水率,延缓果实的衰老过程。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 1.1 多糖概述
• 1.1.1 多糖的研究概况
• 1.1.2 多糖来源及分类
• 1.1.3 多糖的生物活性
• 1.1.4 目前多糖研究存在的问题
• 1.2 莱菔子的研究概况
• 1.2.1 莱菔子简介
• 1.2.2 莱菔子化学成分研究概况
• 1.2.3 莱菔子药理研究概况
• 1.2.4 莱菔子中有效成分的研究概况
• 1.3 本课题研究的目的、意义及主要内容
• 1.3.1 课题来源
• 1.3.2 研究目的及意义
• 1.3.3 主要研究内容
• 第2章 莱菔子水溶性多糖提取分离工艺研究
• 2.1 实验材料与设备
• 2.1.1 实验原料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器和设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 多糖含量的测定方法
• 2.2.2 原料预处理
• 2.2.3 莱菔子多糖热水浸提工艺研究
• 2.2.4 莱菔子多糖微波辅助提取工艺研究
• 2.2.5 莱菔子多糖醇沉工艺研究
• 2.3 实验结果与分析
• 2.3.1 蒽酮-硫酸法测总糖含量标准曲线
• 2.3.2 莱菔子多糖热水浸提工艺的研究
• 2.3.3 莱菔子多糖微波辅助提取工艺的研究
• 2.3.4 莱菔子多糖醇沉工艺的研究
• 2.4 小结
• 第3章 莱菔子多糖脱蛋白、脱色工艺研究
• 3.1 实验材料与设备
• 3.1.1 实验原料
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要仪器和设备
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 莱菔子多糖液的制备
• 3.2.2 莱菔子粗多糖理化性质研究
• 3.2.3 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度标准曲线的制作
• 3.2.4 莱菔子多糖脱蛋白工艺研究
• 3.2.5 莱菔子多糖脱色方法研究
• 3.3 实验结果与分析
• 3.3.1 莱菔子粗多糖理化性质研究
• 3.3.2 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度标准曲线
• 3.3.3 莱菔子多糖脱蛋白方法研究
• 3.3.4 莱菔子多糖脱色方法工艺研究
• 3.4 小结
• 第4章 莱菔子多糖分级、纯度鉴定及性质研究
• 4.1 实验材料与设备
• 4.1.1 实验原料
• 4.1.2 主要试剂
• 4.1.3 主要仪器和设备
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 莱菔子多糖的纯化
• 4.2.2 紫外光谱扫描
• 4.2.3 莱菔子多糖柱层析
• 4.2.4 莱菔子多糖纯度鉴定
• 4.2.5 莱菔子多糖分子量的测定
• 4.3 实验结果与分析
• 4.3.1 莱菔子多糖DEAE-纤维素柱层析
• 4.3.2 莱菔子多糖凝胶柱层析
• 4.3.3 莱菔子多糖醋酸纤维薄膜电泳
• 4.3.4 莱菔子多糖分子量测定
• 4.4 小结
• 第5章 莱菔子多糖抑菌作用研究
• 5.1 实验材料与设备
• 5.1.1 实验材料
• 5.1.2 供试菌种
• 5.1.3 主要试剂
• 5.1.4 主要仪器和设备
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 培养基的制备
• 5.2.2 供试菌株的活化
• 5.2.3 菌悬液的制备
• 5.2.4 多糖液灭菌处理
• 5.2.5 滤纸片的制备
• 5.2.6 抑菌活性测定
• 5.2.7 最小抑菌浓度（MIC）的测定
• 5.3 实验结果与分析
• 5.3.1 莱菔子多糖SRP抑菌作用
• 5.3.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定
• 5.4 小结
• 第6章 莱菔子多糖在水果保鲜中的应用初探
• 6.1 实验材料与设备
• 6.1.1 实验材料
• 6.1.2 主要试剂
• 6.1.3 主要仪器和设备
• 6.2 实验方法
• 6.2.1 实验对象预处理
• 6.2.2 失重率测定
• 6.2.3 总糖含量测定
• 6.2.4 感官指标的测定
• 6.3 实验结果及分析
• 6.3.1 鲜切苹果保鲜实验结果及分析
• 6.3.2 樱桃番茄保鲜实验结果及分析
• 6.4 小结
• 第7章 结论与展望
• 7.1 结论
• 7.1.1 优化了莱菔子多糖提取工艺参数
• 7.1.2 优化了莱菔子多糖脱蛋白与脱色的工艺参数
• 7.1.3 进行了莱菔子多糖的分级纯化
• 7.1.4 研究了莱菔子多糖的抑菌及保鲜功能
• 7.2 进一步工作的方向
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果