论文摘要
第一部分：Livin基因靶向SiRNA协同5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞生物学效应的研究目的构建Livin靶向SiRNA重组表达载体，观察其诱导大肠癌细胞的凋亡效应，研究其对5-氟尿嘧啶的化疗增敏作用。方法构建Livin靶向SiRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞，采用RT-PCR和Western blot方法检测Livin的表达，通过MTT法检测SiRNA对细胞增殖的抑制作用，利用流式细胞仪检测细胞的凋亡效应。另外，采用MTT法和流式细胞仪检测SiRNA对不同浓度5-氟尿嘧啶的化疗增敏作用。结果经酶切鉴定和测序结果证实Livin靶向SiRNA重组表达载体构建成功，它对大肠癌细胞Livin mRNA和蛋白的表达抑制率分别为30．18％和28．88％，肿瘤细胞的生长受到明显抑制，细胞凋亡率为13．36±1．45％，它可以协同5-氟尿嘧啶增强对大肠癌细胞生长的抑制。结论Livin靶向SiRNA重组表达载体构建成功，它能有效抑制Livin基因表达、显著诱导肿瘤细胞凋亡，并能协同5-氟尿嘧啶增强对大肠癌细胞的杀伤作用和诱导凋亡作用。第二部分：Survivin基因靶向SiRNA协同5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞生物学效应的研究目的构建Survivin靶向SiRNA重组表达载体，观察其诱导大肠癌细胞的凋亡效应，研究其对5-氟尿嘧啶的化疗增敏作用。方法构建Survivin靶向SiRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞，采用RT-PCR和Western blot方法检测Survivin的表达，通过MTT法检测SiRNA对细胞增殖的抑制作用，利用流式细胞仪检测细胞的凋亡效应。另外，采用MTT法和流式细胞仪检测SiRNA对不同浓度5-氟尿嘧啶的化疗增敏作用。结果经酶切鉴定和测序结果证实Survivin靶向SiRNA重组表达载体构建成功，它对大肠癌细胞Survivin mRNA和蛋白的表达抑制率分别为36．33％和44．65％，肿瘤细胞的生长受到明显抑制，细胞凋亡率为17．24±2．13％。它可以协同5-氟尿嘧啶增强对大肠癌细胞生长的抑制。结论Survivin靶向SiRNA重组表达载体构建成功，它能有效抑制Survivin基因表达、显著诱导肿瘤细胞凋亡，并能协同5-氟尿嘧啶增强对大肠癌细胞的杀伤作用和诱导凋亡作用。第三部分：Livin基因和Survivin基因联合靶向SiRNA对大肠癌细胞生物学效应的研究目的采用1个载体编码2个shRNA技术，构建Livin和Survivin联合靶向的SiRNA重组表达载体，观察其协同诱导大肠癌细胞的凋亡效应。方法构建Livin和Survivin联合靶向的SiRNA重组表达载体并转染大肠癌细胞，通过RT-PCR和Western blot方法分别检测Livin和Survivin的表达，通过MTT法检测SiRNA对细胞增殖的抑制作用，利用流式细胞仪检测细胞的凋亡效应。结果经酶切鉴定和测序分析证实Livin和Survivin联合靶向的SiRNA重组表达载体构建成功，它对大肠癌细胞Livin和Survivin的mRNA表达抑制率为27．90％和32．24％，对Livin和Survivin蛋白表达的抑制率为22．28％和40．86％。肿瘤细胞生长受到明显抑制，细胞凋亡率为11．69±1．37％，但协同抑制作用比单独干扰Livin或Survivin基因弱。结论Livin和Survivin联合靶向的SiRNA重组表达载体构建成功，它能抑制Livin和Survivin基因表达并能诱导肿瘤细胞凋亡，但协同抑制作用比单独干扰Livin或Survivin基因弱。
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