酪蛋白糖巨肽（CGMP）对大鼠早期结直肠癌影响的研究

论文摘要

随着经济的高速发展以及膳食结构的改变,我国结直肠癌发病率一直呈上升趋势,在全球恶性肿瘤发病率中上升至第三位,其死亡率居恶性肿瘤死因的第二位,深入研究结直肠癌发生发展的分子遗传学机制,寻找并利用有效的早期分子标志物对结直肠癌的预防、诊断以及治疗具有重要的意义。利用膳食中的天然抗癌成分预防癌症是较有效的方法,酪蛋白糖巨肽作为一种生物活性肽,其与抗肿瘤的关系已引起国内外学者的关注。为了解酪蛋白糖巨肽对大鼠结直肠癌异型隐窝灶、p16基因甲基化、p16蛋白、MUC2蛋白的影响,本实验选取健康的雌性wistar大鼠50只,分成五组:正常对照组,模型对照组,低剂量CGMP组、中剂量CGMP组、高剂量CGMP组。其中正常对照组不进行任何处理,模型对照组腹腔注射二甲肼,中、低、高剂量组在腹腔注射二甲肼的同时,灌胃不同剂量的CGMP,分别为10mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d,连续注射和灌胃15周后,处死各组大鼠,取其结肠组织,首先检测结肠末端异型隐窝灶个数,然后取部分结肠组织提取DNA,甲基化修饰后利用甲基化特异性PCR技术检测各组大鼠p16基因甲基化状况,并利用免疫组化技术检测p16蛋白、MUC2蛋白表达。研究结果表明:(1)正常对照组、模型组、以及各剂量CGMP组之间体质量变化无明显差异(2)检测正常对照组未发现异型隐窝灶,模型对照组异型隐窝灶个数为33.1±3.1,低剂量CGMP组其个数为27.8±4.5,中剂量其个数为22.8±5.4,高剂量为20.6±1.9,与模型对照组相比,灌胃CGMP显著抑制了异型隐窝灶的形成,且异型隐窝灶个数呈剂量依赖性降低。(3)检测正常对照组大鼠p16基因未发生甲基化,模型对照组甲基化阳性率为80%(8/10),低剂量CGMP组甲基化阳性率为70%(7/10),中剂量CGMP组甲基化阳性率为40%(4/10),高剂量CGMP组甲基化阳性率为50%(5/10),与模型对照组相比,CGMP抑制了结直肠癌p16基因异常甲基化,中剂量差异具有统计学差异。(4)免疫组化检测p16蛋白和MUC2蛋白表达:p16蛋白和MUC2蛋白在正常对照组均高表达,与模型对照组相比,CGMP各剂量组促进了p16蛋白和MUC2蛋白的表达,且以中剂量效果最佳。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 酪蛋白糖巨肽（CGMP）的研究背景
• 1.1.1 酪蛋白糖巨肽
• 1.1.2 酪蛋白糖巨肽的生物活性
• 1.2 生物活性肽的抗肿瘤功能
• 1.2.1 生物活性肽的抗肿瘤研究进展
• 1.2.2 生物活性肽抗肿瘤的的机制
• 1.3 结直肠癌的研究背景
• 1.4 结直肠癌与与DNA甲基化
• 1.4.1 结直肠癌与整体基因组低甲基化
• 1.4.2 结直肠癌中CpG岛高甲基化
• 1.4.3 营养与结直肠癌DNA甲基化
• 1.5 结直肠癌与p16、MUC2蛋白
• 1.6 DNA甲基化检测原理及方法
• 1.6.1 DNA甲基化检测基本原理
• 1.6.2 DNA甲基化基本方法
• 1.7 选题依据
• 1.7.1 国内外研究现状
• 1.7.2 甲基化特异性PCR技术的优越性
• 1.8 选题意义
• 1.9 研究课题内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验试剂
• 2.3 主要仪器和设备
• 2.4 主要试剂配制
• 2.5 实验方法
• 2.5.1 实验流程
• 2.5.2 CGMP对大鼠早期结直肠癌异型隐窝灶的影响
• 2.5.3 CGMP对大鼠早期结直肠癌p16基因异常甲基化的影响
• 2.5.4 CGMP对大鼠早期结直肠癌p16蛋白、MUC2蛋白的影响
• 第三章 结果与分析
• 3.1 大鼠体质量变化
• 3.2 CGMP对大鼠结直肠癌异形隐窝灶的影响
• 3.3 CGMP对大鼠结直肠癌p16基因异常甲基化的影响
• 3.3.1 大鼠组织基因组DNA提取及含量纯度鉴定
• 3.3.2 正常对照组大鼠p16基因甲基化检测情况
• 3.3.3 模型对照组p16基因甲基化检测情况
• 3.3.4 低剂量CGMP组p16基因甲基化检测情况
• 3.3.5 中剂量CGMP组p16基因甲基化检测情况
• 3.3.6 高剂量CGMP组p16基因甲基化检测情况
• 3.3.7 CGMP对大鼠结直肠癌早期p16基因异常甲基化的影响
• 3.4 CGMP对大鼠结直肠癌p16蛋白的影响
• 3.5 CGMP对大鼠结直肠癌MUC2蛋白的影响
• 第四章 结论与讨论
• 4.1 研究结果
• 4.1.1 CGMP对结直肠癌大鼠体质量变化的影响
• 4.1.2 CGMP对结直肠癌大鼠异型隐窝灶的影响
• 4.1.3 CGMP对大鼠结直肠癌早期p16基因异常甲基化的影响
• 4.1.4 甲基化特异性 PCR 全程控制
• 4.1.5 CGMP对大鼠结直肠癌MUC2蛋白的影响
• 4.2 创新点
• 4.3 研究展望
• 参考文献
• 发表论文、参加科研情况说明以及学位论文使用授权声明
• 致谢