NARC-1蛋白在新西兰兔动脉粥样硬化病变中的表达

论文摘要

人类前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin 9,PCSK9）是应用生物信息学方法和DNA微阵列技术新发现的一种前蛋白转化酶（proprotein convertase, PC）基因,PCSK9基因编码神经凋亡调节转化酶（neural apoptosis-regulated convertase 1,NARC-1）是PC家族的成员之一,它能够在蛋白水平降解LDLR,影响LDL的内化,使血液中LDL不能被清除,从而导致高胆固醇血症,该基因的突变被认为是家族性高胆固醇血症的第三种类型。最近发现,PCSK9除了在胆固醇的动态平衡以及凋亡中可能起着重要作用之外,它还是动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）性大血管疾病的危险因素。研究NARC-1/PCSK9在动脉粥样硬化病变中的表达,将有助于阐明PCSK9基因与动脉粥样硬化的关系,揭示动脉粥样硬化发生的新机制,为动脉粥样硬化的早期防治提供新靶点和新思路。目的:探讨NARC-1在新西兰兔动脉粥样硬化病变血管壁中的表达。方法:健康纯种雄性新西兰白兔16只,适应性喂养1周后,随机分为2组,对照组、高胆固醇组各8只;对照组给予普通颗粒兔饲料喂养,高胆固醇组给予高胆固醇饲料（2%胆固醇）喂养;两组动物于8周末安乐处死。全自动生化分析仪测定兔血浆中三酰甘油（triglyceride, TG）、总胆固醇（total cholesterol, TC）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol, HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol, LDL-C）含量,计算动脉粥样硬化指数AI（atherosclerosis index）=（TC-HDL）/HDL、高密度脂蛋白胆固醇/低密度脂蛋白胆固醇比值（HDL-C/LDL-C）。苏丹IV染色测量兔主动脉粥样硬化病变面积。油红O染色及HE染色观察兔主动脉病理组织学改变并进行病理形态学定量分析。免疫组织化学法与Western印迹法检测兔主动脉组织NARC-1蛋白的分布及表达水平。结果:8周末,高胆固醇组兔血浆TC、HDL–C、LDL-C、AI水平明显升高,而HDL-C/LDL-C比值明显降低。高胆固醇组出现了明显的动脉粥样硬化病变,主动脉内膜面粥样硬化病变面积为（27.41±2.12）%,与对照组（0.51±0.20）%相比,差异具有显著性（P<0.05）。病理组织学显示高胆固醇组兔主动脉内膜（intima,I）明显增厚,内膜/中膜（media,M）厚度比值（I/M）明显增大;油红O染色后光镜下观察,可见高胆固醇组兔主动脉内皮下斑块内泡沫细胞呈橘红色,对照组主动脉内膜未见明显着色;HE染色后光镜下观察,高胆固醇组主动脉内膜显著增生,形成明显斑块,斑块中纤维组织增生,可见大量泡沫细胞,胞核较小,胞浆内含有大量脂质空泡,对照组内膜薄且结构完整。免疫组织化学检测发现高胆固醇组兔主动脉NARC-1蛋白表达明显,染色呈强阳性,且群集于内膜斑块处,在高倍镜下观察,NARC-1蛋白主要分布在泡沫细胞的胞浆和胞膜,而在对照组兔血管壁组织中未见表达。Western印迹检测发现高胆固醇组兔主动脉NARC-1蛋白呈高表达,而对照组兔血管壁组织未见表达。结论:新西兰兔的主动脉粥样硬化病变处NARC-1蛋白表达明显,其主要分布在泡沫细胞的胞浆和胞膜中,正常对照组兔主动脉血管壁组织未检测到NARC-1蛋白。提示NARC-1/PCSK9是影响动脉粥样硬化病变形成与发展的重要因素。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、正文
• 1. 前言
• 2. 实验材料
• 3. 实验方法
• 4. 实验结果
• 5. 讨论
• 6. 结论
• 四、参考文献
• 五、主要缩略语英文索引
• 六、综述
• 七、硕士期间发表的论文
• 八、致谢