论文摘要
自上世纪90年代初起，纳米科技得到了迅速发展，已广泛应用于电子、信息、半导体、生物和医药等领域。越来越多的国家开始增加在该领域研究的投资，以期在这个孕育着巨大商机的领域中夺得先机。然而随着研究的深入和发展，纳米材料的生物安全性问题引起越来越多的关注，已有的一些研究证据也表明某些纳米材料对人类的健康的确存在潜在的危害。为保证纳米科技的健康发展，进行纳米技术的生物安全性评估及研究已迫在眉睫。本实验室近年来一直致力于壳聚糖及其衍生物作为基因运载体系的研究，在本实验室前期工作基础上，本研究选用壳聚糖、精氨酸修饰的壳聚糖基因和烷基化修饰的壳聚糖作为载体制备基因纳米粒子，并就其对巨噬细胞功能的影响进行了初步研究。研究内容主要分为三个部分：1．制备祛除内毒素的质粒DNA，壳聚糖及其上述两种衍生物与DNA按照N／P比4：1的比例采用复凝乳方法制备纳米粒子；采用透射电镜，原子力显微镜和动态光散射的方法进行表征和观察。2．将上述三种材料与DNA形成的纳米粒子分别以0.1，1，10，20μg／ml的浓度（以DNA的含量为标准）与小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞共孵育，在1h，6h，24h后检测细胞上清中细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α的浓度，以观测纳米粒子是否刺激RAW264.7细胞分泌细胞因子的增加。结果显示纳米粒子在上述浓度时，24小时之内细胞因子的分泌与阴性对照相比并无显著差别。3．将1 ml50μg／ml的壳聚糖及其修饰物与DNA形成的纳米粒子注入小鼠腹腔，24 h之后抽取腹腔巨噬细胞，再与预先制备的鸡红细胞悬液在体外共孵育半小时，涂片镜检计算巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，评价纳米粒子是否激活了小鼠腹腔的巨噬细胞，使其吞噬能力增强。结果显示腹腔注射纳米粒子并未引起巨噬细胞的吞噬能力增强。
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标签：壳聚糖论文; 精氨酸修饰壳聚糖论文; 烷基化修饰壳聚糖论文; 纳米粒子论文; 非病毒基因载体论文; 生物安全性论文;