论文摘要
支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）是一类定植在动物呼吸道黏膜纤毛上皮细胞上的革兰氏阴性、需氧球杆菌,是引起猪萎缩性鼻炎（Atrophic rhinitis 0fSwine,AR）的重要病原菌,单独感染可引起猪的非进行性萎缩性鼻炎（Non-progressingatrophic rhinitis,NPAR）,若与产毒素性多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）混合感染则可引起猪的进行性萎缩性鼻炎（Progressive atrophic rhinitis,PAR）。AR是一种慢性接触性呼吸道传染病,其主要特征是鼻塞、打喷嚏、流鼻血、咳嗽、呼吸不畅、颜面变形或鼻梁歪斜等,属于世界动物卫生组织（OIE）的B类重大传染病,亦被我国列为二类动物疫病,是进出口动物卫生检测标准中的必检项目。本研究通过采集贵州省11个养猪场的猪鼻腔棉拭子进行了Bb的分离与鉴定;通过BbⅠ相菌的筛选与鉴定,制备Bb凝集诊断抗原,对24个不同养猪群进行Bb血清抗体的检测;通过疫苗接种和药物治疗对AR污染种猪场A进行了控制与净化研究。具体内容包括:1、贵州省猪群Bb的分离与鉴定:采集11个养猪场156头份鼻腔棉拭子进行Bb的分离,通过培养特性与生化特征的鉴定,结果细菌分离物在葡萄糖改良麦康凯中呈茶色或茶黄色菌落,在TSA上呈奶油状菌落;染色镜检为革兰氏阴性、无芽胞的球杆菌,硝酸银染色可见周毛菌;经生化鉴定,符合Bb生化特点的分离物共计34株,分离率为21.8%（34/156）。针对Bb FlaA基因上游序列选择合成一对特异性引物（Fla1/Fla2）,对34株Bb分离物进行PCR鉴定,结果所有分离物均能扩增出约240bp特异性DNA条带,与传统的生化反应鉴定完全一致,且最小检出量为0.64pg;而猪鼻腔和肺组织中常见的其它细菌均显现阴性反应。将PCR产物进行酶切分析,结果酶切产物与DNAStar软件分析结果相符合;克隆后测序,结果该基因片段全长为237bp,与预期大小和序列一致;应用该PCR方法对27份猪鼻腔棉拭子进行临床检测,结果Bb检出率为25.9%（7/27）,检出率较传统的细菌学方法高。2、贵州省猪群Bb血清抗体的检测:首先采用结晶紫染色法（CV）对贵州省Bb分离物进行Ⅰ相菌筛选后,再行细菌的形态结构、培养特性和外膜蛋白分子量鉴定,结果CV+菌为深紫色菌落,节思明染色可见无色透明荚膜,在血平板上呈β溶血,经SDS-PAGE电泳可见74kD蛋白带,即为BbⅠ相菌,而CV-菌为无色菌落、节思明染色未见荚膜、在血平板上呈γ溶血,经SDS-PAGE电泳无74kD蛋白带,即为Bb菌相变异菌。利用Ⅰ相菌制备Bb凝集诊断抗原,并确定凝集诊断抗原的最佳反应条件后,用于贵州省24个不同养猪群1077份血清样本的Bb血清抗体检测,结果在3个表现AR临床症状的猪群中,Bb血清抗体的阳性率61.36%（54/88）;在12个未表现AR临床症状的中猪群,Bb血清抗体的阳性率为6.71%（37/552）;在9个屠宰场的猪群中,Bb血清抗体的阳性率为8.92%（39/437）,表明Bb血清抗体的阳性率与AR临床症状出现具有相关性,且我省部分养猪场存在Bb隐性感染状态,应加以重视。3、AR污染种猪场的控制与净化研究:在病原学检查和血清学检测中发现,种猪场A为AR感染较为严重的猪场之一。本研究采取疫苗接种和药物防治,结合淘汰病猪和加强饲养管理等综合措施,在项目实施期间,共淘汰临床发病母猪（包括后备母猪）50头,淘汰率为8.1%（50/620）;隐性带菌猪经药物治疗后快速育肥出售800头;其余临床健康猪只（包括所产仔猪）采取疫苗接种和药物控制措施,以猪群临床症状消失、细菌学检查转阴率和抗体阳性率为判定指标,结果在种猪场A中连续10个月观察未见AR新临床病例;第二次抽检后的连续5次仔猪鼻腔棉拭子130份,均未检出AR病原菌Bb和Pm,即细菌转阴率达100%,且Bb抗阳性率达90.0%以上。这些结果表明AR在种猪场A已得到成功的净化。
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