Endostatin抑制NSCLC增殖及转移效应的观察及其机制探讨

论文摘要

研究背景：肺癌的发病率在全世界范围逐年上升，亦是死亡率最高的恶性肿瘤之一。非小细胞肺癌（NSCLC）约占肺癌的80％，临床确诊时约有80％的患者已达晚期。在其治疗中，化疗仍扮演重要角色，但同一方案化疗使用＞3个周期时，临床疗效多为无变化（SD）或进展（PD），提示耐药是肺癌中普遍存在的问题、因而往往导致治疗失败。20世纪70年代初，Folkman提出了关于肿瘤依赖于血管发生的假设：早期肿瘤不依赖血管供养，但当瘤块直径＞1～2mm时，即可分泌各种肿瘤血管发生因子（Tumor angiogenesis factor TAF）、引起血管内皮细胞增殖、迁移，在瘤块内形成新的毛细血管、保证肿瘤继续生长、特别是向远方转移。因此，抑制肿瘤形成新生血管形成可能成为有效的治疗手段。目前发现的抑制血管生长因子主要有：干扰素、白介素12、白介素18、血小板因子4、肿瘤坏死因子、血小板反应素、血管抑制素（Angiostatin）及内皮抑制素（Endostatin）等。其中O‘Reilly等发现的Endostatin较为理想，它能抑制血管内皮细胞增殖、诱导其凋亡、抑制肿瘤形成新生血管。由于其靶细胞是基因型相对稳定的血管内皮细胞，很少发生变异，Endostatin不易诱发耐药。此外，Endostatin与其他化疗药物联合应用还具协同作用。由于Endostatin为肿瘤治疗提供了更广阔、更有希望的前景，许多国内、外学者尝试将其用于临床治疗。但迄今为止，对它的研究仍刚刚起步、许多问题悬而未决；主要包括：（1）Endostatin抗新生血管形成的作用细节是什么、这种作用能否转化为活体中的抗肿瘤转移效果?（2）除血管内皮细胞外，Endostatin对肿瘤细胞有无直接效应?针对上述问题，进行了相关的细胞和实验动物体外和体内实验研究，报告如下：目的：（1）观察Endostatin对非小细胞肺癌细胞的直接作用、并与化疗药物顺铂（DDP）的作用进行了比较。（2）观察Endostafin对肺癌移植瘤生长及转移的影响并初步探讨其作用机制。方法：（1）通过动物实验观察荷高转移肺癌细胞之小鼠经Endostatin和化疗药物DDP作用后瘤体生长情况（抑瘤率）以及原接种及肺转移之瘤组织中的血管内皮生长因子（VEGF）表达和微血管密度（MVD）、肺转移发生数量，并分析各指标间的关联性。（2）通过细胞实验观察Endostatin及DDP对人肺癌细胞株Calu-6细胞周期分布的影响与抑制率，并比较各种药物及各剂量作用间的差别。结果：（1）动物实验观察证实：接种高转移肺癌细胞之小鼠经Endostatin作用后，抑瘤率DDP组为最高，与其它各组比较差异有显著性（P＜0.05）；400ug组和300ug组次之；200ug＋DDP组再次；200ug组抑瘤作用最弱；原接种处之瘤组织中的血管内皮生长因子（VEGF）明显降低（P＜0.05），微血管密度（MVD）亦降低、但无统计学意义（P＞0.05）；肺转移灶之瘤组织中的VEGF和MVD均明显降低（P均＜0.05）、肺转移发生亦同时降低，各观察指标间具有正相关性。（2）Endostatin可以直接抑制Calu-6肺癌细胞生长，其抑制作用表现出时间依赖性而并未表现出剂量强度依赖性、且其作用弱于DDP。但并未观察到Endostatin可以造成Calu-6肺癌细胞增殖周期分布的改变和明显的凋亡现象。结论：（1）Endostatin可降低原位移植瘤中的VEGF及转移瘤中的VEGF和MVD、抑制远方转移；（2）Endostatin可以直接抑制Calu-6肺癌细胞生长，其作用强度有时间依赖性而无明显剂量依赖性，但不如DDP强烈。创新点：（1）首次报告Endostatin可直接抑制Calu-6肺癌细胞增殖、抑制活体内的肿瘤生长，其作用强度有时间依赖性而无剂量依赖性。（2）首次验证经Endostatin作用后实验动物的原位移植及转移瘤中的VEGF、MVD及其与转移发生间的关系（即Endostatin对转移的预防作用）。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 绪论
• 对象与方法
• 1 细胞实验
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 统计分析方法
• 2 动物实验
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 统计分析
• 结果
• 1 细胞实验
• 1.1 培养细胞的生长状态
• 1.2 Endostatin和DDP对Calu-6细胞的抑制作用
• 1.3 Endostatin对Calu-6细胞周期的影响
• 2 动物实验
• 2.1 Endostatin及DDP对移植瘤体生长的影响
• 2.2 Endostatin对移植瘤组织中VEGF表达的影响
• 2.3 Endostatin对肺转移瘤组织中VEGF表达的影响
• 2.4 移植瘤与肺转移瘤组织中VEGF表达间的关联性检验
• 2.5 Endostatin对移植瘤组织中MVD的影响
• 2.6 Endostatin对肺转移瘤组织中MVD的影响
• 2.7 移植瘤与肺转移瘤组织中MVD表达间的关联性检验
• 2.8 Endostatin对肺转移的影响
• 讨论
• 总结
• 拟今后继续开展的研究工作
• 参考文献
• 在学期间发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 致谢