论文摘要
犬乳腺肿瘤是兽医临床常见的一种肿瘤性疾病。犬乳腺肿瘤病因、肿瘤组织学特性、药物和手术治疗方法以及预后等都与人类乳腺肿瘤较为相似。因此，自然发生乳腺肿瘤的犬已成为人类研究乳腺肿瘤疾病最好的动物模型。本实验采用病理组织学和免疫组织化学、细胞生物学技术等方法针对收集到的犬乳腺肿瘤自然发生病例和犬乳腺肿瘤细胞系进行研究，以期为犬乳腺肿瘤疾病的诊断和治疗提供理论依据。实验选用从自然发生乳腺肿瘤病例的原发病灶和转移病灶分离培养的四种细胞(CHM_p、CHMm、CIPp、CIPm)，经传代120代以上、生长性状稳定的细胞系作为研究对象，对不同细胞系的性状进行解析。通过消化法培养细胞生长，其生长曲线符合“S”形生长曲线，倍增时间分别为21.3h，35.3h，42.3h，49.1h。细胞经多次传代之后形态无显著差异。采用MTT检测和软琼脂培养比较分析：CHMp、CHMm不论是在细胞活力方面还是增值能力方面都要强于CIPp、CIPm。实验结果证明，不同来源的细胞系生物学特性差异很大。同时，本研究对外科手术摘除疑似乳腺肿瘤样本10例，采用病理组织学观察进行分类，采用免疫组织化学方法，使用抗p53和CD44抗体检测病料组织，并对抗体表达和病理类型进行比较。结果证明，恶性乳腺肿瘤占50％，其中乳腺浸润性导管癌占30％；良性肿瘤30％，其中乳腺非肿瘤性疾病20％。p53多克隆抗体在乳腺癌组织中的表达明显高于良性乳腺肿瘤组织，差异极显著。CD44在乳腺癌、良性肿瘤组织和非肿瘤组织中均有表达，无明显差异。p53可作为动物预后指征之一。通过对细胞系的免疫组织化学分析，结果显示：不同细胞系中p53、CD44、VEGF三种抗体均为阳性反应，但有不同的临床意义：VEGF在4种细胞系中表达无差异，表明在转移组和原发组乳腺肿瘤细胞中功能和作用机理类似；CD44在4种细胞系中的表达均有差异，表明其不能作为独立的预后指标，需要其他因素共同参与调节乳腺肿瘤的浸润和转移；p53在活性和增殖能力最弱的CIPm细胞中表达强度最弱，与组织中的表达结果相符合，证明p53作为动物预后指标的可靠性。