基于调节性T细胞的雷公藤甲素抗B16-F10荷瘤机制研究

论文摘要

背景：调节性T（regulatory T, Treg）细胞是一群具有抑制其他免疫细胞功能的负调控细胞,可通过多种方式抑制抗肿瘤免疫反应。近年来,如何有效清除和控制Treg细胞已成为肿瘤免疫的研究热点。雷公藤甲素是雷公藤中抑制淋巴细胞增殖作用最强的单体,对多种淋巴细胞都有明显的抑制增殖的作用,但其对调节性T细胞的作用还未见报道。目的：研究雷公藤甲素对B16-F10荷瘤鼠调节性T细胞的影响以及分子机制,为改善肿瘤免疫治疗效果提供新思路。方法：（1）体外实验：MTT法检测雷公藤甲素在体外对B16-F10的杀伤作用：培养B16-F10细胞,以每孔2×10-1个细胞种板,分别用雷公藤甲素处理24h、48h、72h,加入MTT孵育4小时,于570nm检测OD值。（2）体内试验：50只C57小鼠随机分为正常组、模型组、环磷酰胺治疗组、雷公藤甲素高剂量组和雷公藤甲素低剂量组,除正常组外,其余各组建立B16-F10荷瘤小鼠模型,造模第2d各组开始给药,正常组和模型组用生理盐水灌胃,雷公藤甲素组灌胃给药,连续14d。环磷酰胺治疗组腹腔注射1周,流式细胞仪检测脾脏CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞比例、实时定量聚合酶链反应检测FOXP3、IL-10 mRNA表达、酶联免疫吸附试验测定外周血IL-10、TGF-β含量。结果：体外实验：随着雷公藤甲素药物浓度的增加,B16-F10细胞生长明显被抑制,其作用特点表现为明显的浓度和时间依赖性。体内试验：用药两周后,雷公藤甲素高剂量组抑瘤率为33.88%,低剂量组抑瘤率为21.08%,环磷酰胺抑瘤率为34.76%；模型组脾脏Treg水平明显升高,雷公藤甲素和CTX治疗组Treg水平较模型组降低,RT-PCR结果显示雷公藤甲素干预后,FOXP3. IL-lOmRNA水平与模型组相比显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。雷公藤甲素有效降低外周血中IL-10. TGF-β含量。结论：雷公藤甲素能够抑制荷瘤鼠肿瘤生长,其作用机制可能是雷公藤甲素通过降低荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞调节性T细胞比例,以及抑制包括IL-10 TGF-β在内的免疫负调控细胞因子的分泌,实现其免疫调节作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词
• 第一章 绪论
• 1 调节性T细胞与肿瘤的关系
• 1.1 Treg的分类
• +CD25⁺Treg的认识'>1.2 当前对CD4⁺CD25⁺Treg的认识
• +CD25⁺Treg细胞表型'>1.2.1 CD4⁺CD25⁺Treg细胞表型
• 1.3 Treg的免疫学性质
• 1.4 Treg和肿瘤的关系
• 1.5 肿瘤微环境中调节性T细胞数量升高的机制
• 1.6 针对Treg的肿瘤治疗策略
• 1.6.1 非特异性和特异性清除Treg
• 1.6.2 控制Treg的数量和功能
• 1.6.3 脂多糖或CpG活化APC细胞途径
• 1.6.4 GITR配体
• 1.6.5 输注FasL蛋白
• 1.6.6 阻断转录激活因子（STAT）
• 1.6.7 蛋白分子转移
• +CD25⁺Treg在肿瘤免疫领域的研究前景'>1.7 CD4⁺CD25⁺Treg在肿瘤免疫领域的研究前景
• 2 雷公藤甲素抗肿瘤的研究概况
• 2.1 抑制肿瘤细胞增殖
• 2.1.1 干预细胞周期
• 2.1.2 通过其它方式抑制细胞增殖
• 2.2 抗血管生成
• 2.2.1 抑制VEGF的表达
• 2.2.2 抑制基质金属蛋白酶的活性
• 2.3 雷公藤甲素诱导细胞凋亡
• 2.3.1 对半胱天冬蛋白酶通路的调控
• 2.3.2 抑制核因子-κB激活
• 2.3.3 对p53表达的调控
• 2.3.4 抑制AP-1的活性
• 2.3.5 抑制热休克蛋白（HSP）表达
• 2.4 抗肿瘤转移
• 2.5 抗炎、抗氧化作用
• 3 本课题立题依据和研究内容
• 第二章 雷公藤甲素在体外对B16-F10的杀伤作用
• 1 前言
• 2 实验材料
• 2.1 细胞系
• 2.2 药物及试剂
• 2.3 主要仪器及耗材
• 3 实验方法
• 3.1 细胞复苏
• 3.2 细胞传代
• 3.3 MTT法
• 4 实验结果
• 5 讨论
• 第三章 雷公藤甲素对B16-F10荷瘤小鼠的治疗体内实验
• 1 前言
• 2.实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 细胞系
• 2.1.3 药物及试剂
• 2.1.4 主要仪器及耗材
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 动物模型及分组
• 2.2.2 给药方法
• 2.2.3 取材
• 3 观测指标及检测方法
• 4 数据处理方法
• 5 实验结果
• 5.1 雷公藤甲素对抑瘤率的影响
• 5.2 雷公藤甲素对荷瘤鼠脾指数的影响
• 5.3 雷公藤甲素对荷瘤鼠体重的影响
• +CD25⁺Foxp3⁺T细胞亚群的影响'>5.4 雷公藤甲素对荷瘤鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺T细胞亚群的影响
• 5.5 雷公藤甲素对荷瘤鼠外周血IL-10和TGF-β的影响
• 5.6 雷公藤甲素对B16-F10细胞荷瘤鼠脾脏细胞FOXP3、IL-10、TGF-β mRNA表达的影响
• 6 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢