论文摘要
本研究利用狂犬病病毒糖/核蛋白“二价”DNA 疫苗pVGN,评价狂犬病DNA 疫苗生物安全性;同时开展了该疫苗在家犬的田间免疫试验,对其实际应用效果进行了综合评定,旨在为该疫苗的应用提供相关数据。免疫40 条2～3 月龄犬后,不同时段采集受试点周围水体、受试犬粪便、唾液、尿液等代谢物以及性腺、胎儿、注射部位、心、肝、脾、肾脏等组织,并以卡那霉素筛选水体和粪便中抗性菌落。以PCR、Southern 杂交等手段检测DNA、抗性基因在环境及受试动物体内的存留、转移和整合情况;制备石蜡切片,观察上述脏器是有无病理学变化。结果显示,受试犬未出现任何异常临床生理反应;DNA 疫苗携带的卡那霉素抗性基因未转化入肠道菌群;质粒DNA 没有被排放到外界环境中;在心、脾、肾和注射部位均能检测到质粒DNA 或其主要元件,并分别能存留约18、14～18、14 和26 周以上,但在主要代谢器官肝脏中一直未检测到质粒DNA 或其主要元件;质粒DNA 未与染色体DNA 发生整合;上述主要脏器及注射部位组织均未出现病理学变化;在性腺和胎儿组织中均未检测到质粒DNA。免疫302 条家犬,3 次免疫后家犬抗体阳转率为58%;组间抗体水平差异不显著(P>0.05),但自二免后,两侧肌肉免疫组较联合免疫组抗体水平略高;抗体阳转犬产生了针对狂犬病病毒糖、核蛋白两种抗体,且抗糖蛋白抗体具有一定的中和作用,经间接免疫荧光测定,大部分犬抗体稀释8～512 倍后,每50μL 可以中和100 TCID50 SRV9,经小鼠脑内接种试验,大部分犬抗体稀释8～16 倍后,每15μL 可以中和
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