桑黄抗肿瘤活性物质的提取及活性检测

论文摘要

“桑黄”为担子菌亚门（Basidiomycotina）,层菌纲（Hymenomycetes）,多孔菌目（Polyporales）,锈革孔菌科（Hymenochaetacae）,针层孔菌属（Phellinus）的真菌,东亚的国家中已经被当作一种传统的药使用,用于治疗胃肠混乱,降火和淋巴的疾病。特别是它的抗肿瘤活性,桑黄也有许多优势作为抗癌候选药之一,被人们所关注。1.桑黄多糖的分离纯化及活性研究本部分,以桑黄Phellinus baumii为研究对象,从烘干菌丝体中通过水溶醇提法得到粗多糖,进一步经过DEAE-Sephadex A-50,以及Sephadex G-75柱层析得到一活性峰（PB）,进一步研究发现,该多糖分子量约为17kDa。这是一种新的活性多糖。以PB为对象进行活性研究,体外活性检测发现,PB能有效刺激小鼠腹腔巨噬细胞、小鼠脾细胞以及小鼠巨噬细胞株RAW264.7增殖。进一步研究发现,PB能显著提高RAW264.7细胞NO的释放量,同时能显著增加IL-1β,IL-18,IL-6,IL-12p35和IL-12p40基因的表达水平,并且具有浓度依赖性。同时研究发现,PB对人肝癌细胞株HepG-2、人肠癌细胞株HCT-8细胞发挥直接的抑制作用,进一步研究发现,PB是通过阻断HepG-2细胞周期的S期来达到抑制生长的作用的,同时,在高浓度长时间作用下,PB还能诱导HepG-2细胞发生凋亡现象。因此,从桑黄Phellinus baumii菌丝体中提取的新的活性多糖（PB）同时具有广泛的免疫增强活性及直接的抑制肿瘤细胞增殖的活性。这些结果同时也说明,桑黄菌丝体多糖同样具有与子实体多糖相似的生物活性。而桑黄菌丝体生长周期短,产量高,因此,本部分为桑黄的进一步研究应用提供了新的途径。2.桑黄菌丝体乙醇粗提物活性的研究除了活性多糖外,桑黄还含有多种活性成分,如黄酮等。本部分,以桑黄烘干菌丝体为研究对象,通过乙醇提取法提取桑黄有效成分,对乙醇粗提物进行初步的研究。研究发现,桑黄菌丝体乙醇提取物含有少量的黄酮类物质。同时体外活性检测发现,该乙醇提取物能显著抑制HepG-2细胞的增殖。该乙醇粗提物处理HepG-2细胞后,其细胞形态出现明显的变化,细胞变圆、皱缩,体积变小；经过annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测,证明HepG-2细胞发生了凋亡；研究还发现,桑黄乙醇粗提物处理HepG-2细胞后,随着药物浓度和作用时间的增加,凋亡抑制基因BCL-2 mRNA的表达,逐渐减少；而凋亡促进基因BAX mRNA的表达随之增加；研究结果显示桑黄乙醇粗提物能够通过上调凋亡促进因子的表达,下调凋亡抑制因子的表达达到诱导HepG-2细胞凋亡的效果。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 名词缩写
• 第一章 文献综述
• 1 真菌多糖的抗肿瘤活性
• 2 真菌多糖的研究手段
• 3 桑黄的研究概况
• 4 本研究的目的及意义
• 第二章 桑黄菌丝体水溶性多糖提取、分离纯化
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第三章 桑黄多糖PB的免疫调节活性研究
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第四章 桑黄多糖PB抑制肿瘤细胞增殖作用的研究
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第五章 桑黄胞内黄酮类物质的提取及活性检测
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表文章情况