周新平1霍永平1通讯作者阎丽婷1张海峰2朱庆芬1栗飞1
1.邯郸市中心医院乳腺外科、妇二科河北邯郸056001；
2.曲周县医院外科河北邯郸057250
【摘要】目的：探讨乳腺癌区域淋巴结在转移和无转移状态下免疫细胞数量的变化，认识区域淋巴结在机体抗肿瘤中的免疫状态。方法：从2013年6月~2014年3月间，选择女性非特异性导管癌26例，术中共取腋窝淋巴结42枚，按HE染色结果将淋巴结分为转移和无转移两组，采用流式细胞技术，检测CD86+DCs细胞阳性细胞数占总淋巴细胞数的比例，并在两组之间进行比较。结果：42枚淋巴结18枚有转移，24枚无转移；CD86+DCs在淋巴细胞中占的比例在两组间有显著性差异（t=2.061，P<0.05）。结论：乳腺癌腋窝淋巴结发生癌转移后，CD86+DCs的比例下降。
【关键词】乳腺肿瘤；流式细胞技术；淋巴转移；免疫学
【中图分类号】R737.9【文献标识码】B【文章编号】1674-8999（2015）8-0109-01
TheContrastingAnalysisonTheCD86+DCsCellsofRegionalLymphNodesinBreastCancerPatients
ZhouXinPing1HuoYongping1YanLiting1ZhangHaiFeng2ZhuQingFen1LiFei1
1(DepartmentofMammaryGlandSurgery,theCentralHospitalofHandanCity,Handan056001,P.R.China)
2(DepartmentofSurgery,thePeopleHospitalofHandanCity,Handan056001,P.R.China)
【Abstract】Objective：Toevaluatetheimmunecellnumberinaxillarylymph-nodewithbreastcancer.Andtostudytheroleofregionallymphnodesinthecourseofhumanbodypreventingtumor.Methods:42axillarylymphnodeswereexamindedinallpatients(26cases).Weusedroutinepathologicaldiagnosistodeterminethestatusofthenodes.AndflowcytometrywasusedtoanalyzethemarkersonthesurfaceoflymphocytessuchasCD86+DCsinaxillarylymph-nodeofbreastcancer.Results:Amongall42lymphnodes,none-metastasiswerefoundin24nodes,andmetastasisin18nodes.TheratioofCD86+DCscellsshowedsignificantlydifferencebetweenthetwogroupst=2.061，P<0.05).Conclusion:Inreginallymphnodeswithbreastcancer,theimmunecellsratioofCD86+DCswerechangedwhenmetastasisoccurred.
【Keywords】Breastnroplasms;Flowcytometry;Lymphaticmetastasis;Immunology
Black[1]等经过研究后认为肿瘤淋巴结具有抗肿瘤免疫学作用,作为整个免疫系统的重要组成部分，肿瘤引流淋巴结提供抗原识别和特异性免疫细胞致敏场所，并且伴随着免疫反应而在细胞组成比例和结构方面发生改变，以此被动或主动的参与机体与肿瘤之间的免疫活动。
1资料与方法
2013年6月~2014年3月间选择乳腺癌改良根治术的患者26例，共收集腋窝淋巴结42枚。每个淋巴结沿中线切开，一半做常规病理检查，一半于24小时内作流式细胞仪分析。收集单细胞悬液，离心沉淀1000prm，5min。弃上清，加入PBS液100μl，以台盘伊红染色计数细胞器轻轻吹打均匀，将单细胞悬液分装于3个EP管内，按顺序每管分别加入以下试剂50μl，轻轻摇匀：①PEmouseIgG1和FITCmouseIgG1抗体；②FITCanti-HumanPEanti-HumanCD86抗体。将以上EP管放入4℃冰箱40min，多聚甲醛固定后避光保存，流式细胞仪检测结果。统计学处理：应用SPSS10.0统计软件，应用t检验比较转移和非转移淋巴结中检测的阳性细胞比率均数，显著性检验水准为P<0.05。
2结果
CD86+DCs在淋巴结中不同转移状态下细胞比率在转移组与无转移组间的均值具有显著性差异:t=2.061，P<0.05.
3讨论
树突状细胞（dendriticcells,DC）是目前所知的机体内功能最强的抗原提呈细胞,其最大的特点是能够显著刺激初始T细胞进行增殖，是机体免疫应答的始动者，在免疫应答介导中具有独特地位，与肿瘤的发生发展及预后密切相关，瘤组织中DC浸润多者其预后良好。有研究认为机体之所以发生肿瘤可能是由于肿瘤浸润性树突状细胞（tumorinfiltratingdendriticcells,TIDC）或荷瘤机体DC功能缺陷，无法有效提呈肿瘤抗原、激活T细胞诱导对肿瘤细胞的杀伤作用，还发现乳腺癌患者TIDC的数量与肿瘤大小、淋巴结转移及雌激素受体表达有关。DC的功能与成熟度有关，未成熟DC表达低水平的辅助刺激分子和粘附分子，具有极强的抗原内吞和加工处理能力，成熟DC的细胞表型特征是高表达MHCⅠ类分子、MHCⅡ类分子、CD80、CD86、CD40、细胞间粘附分子等免疫刺激分子，同时CD11c、CD83也是人成熟DC的标志。它们能有效的将抗原提呈给初始T细胞并使之激活。如果MHC-Ⅱ类分子低表达的功能低下或无能DC无法有效提呈外来抗原，因而也就无法激活T细胞引发机体抗瘤免疫能力。
T细胞的完全激活有赖于双信号途径的转导[2]，第一信号是DC上的MHC类分子与特异性抗原的复合物和T细胞上的T细胞受体相互作用，第二信号主要由T细胞上的CD28与DCs上的CD80、CD86相结合所提供，后一传导途径被称为共刺激途径，DC细胞表面的共刺激分子CD80、CD86只有与静止型T细胞表面的CD28分子结合后，才能使T细胞活化，刺激T细胞的增殖和分化，诱导CTL反应，因此第二信号在机体抗肿瘤中起关键作用。本次研究CD86作为具有共刺激DC的标志以及成熟DC的标志之一。
本次研究结果表明：乳腺癌腋窝淋巴结发生癌转移后，细胞免疫功能发生改变，CD86+DCs细胞比例下降，证实癌细胞转移入区域淋巴结后，改变了淋巴结的微环境，不利于机体有效清除肿瘤细胞。
参考文献：
[1]AlistairJ.Cochran,Rong-RongHuang,JonathanLee,etal.Tumour-inducedimmunemodulationofsentinellymphnodes.TumourImmunology[J].2006,（6）：659－670
[2]HoffmannTK，MeidenbauerN，Muller-BerghauJ，etal.ProinflammatorycytokinesandCD40ligandenhancecross-presentationandcross-peimingcapabilityofhumandendriticcells
基金项目：
邯郸市科技发展计划项目（项目编号1223108090-10）
通讯作者：
霍永平（1979-），男，汉族,河北曲周人，肿瘤学硕士，主治医师，主要从事乳腺疾病的临床及基础研究。