唑来磷酸盐对成骨细胞作用的初步研究

论文摘要

双膦酸盐是目前临床常用于治疗以骨转化过度为特征的疾病的一类药物,其中唑来磷酸盐作为最新一代双膦酸盐的代表,具有最强的抑制骨吸收的作用。尽管这种药物在临床上应用广泛,疗效确切,但是现在还不完全明了双膦酸盐发挥其药理学作用的具体机制。过去的研究都主要集中于双膦酸盐对破骨细胞的作用,现已有许多文献详细地阐述各种双膦酸盐对破骨细胞通过各种直间接途径产生强大的抑制作用,而对双膦酸盐对成骨细胞作用的研究较少较局限,得到的结论存在着许多矛盾。双膦酸盐引起的颌骨坏死（BRONJ）是使用双膦酸盐带来的一种少见但严重的副作用,它严重影响了患者的生活质量和对双膦酸盐治疗的信心,因此需要口腔临床医师提高对这种疾病的认识。目前关于BRONJ的发病机制存在着数种假说,各种假说都存在着合理性及不足之处,因而在BRONJ发病机制这个研究方向上仍需要更多的研究努力。自噬是细胞内部的一种分解代谢过程,在细胞清除废物、结构重建以及生长发育中起重要作用,与衰老、免疫系统发挥功能、肿瘤的发生发展、神经退行性病变及细胞死亡等生理病理过程有密切的联系。骨组织和软骨组织具有独特的缺血缺氧的微环境,在生理条件下自噬是包埋在无血管骨基质中成骨/骨细胞的一种供能形式。双膦酸盐能够抑制血管形成,会进一步加重骨组织缺乏血管供应的情况,因而自噬在双膦酸盐引起的无血管颌骨坏死的发病过程中应当会起到一定的作用。这篇论文主要讨论不同浓度的唑来磷酸盐作用于成骨细胞系MC3T3细胞后对其增殖情况、自噬蛋白Beclin1和MAP LC3的表达及对血管内皮生长因子的表达情况的影响。通过MTT法分析成骨细胞在不同浓度唑来磷酸盐作用下的增殖情况、免疫组织化学染色的方法分析自噬蛋白Beclin 1和MAP-LC3在不同浓度唑来磷酸盐处理过的成骨细胞中的表达情况及酶联免疫分析（ELISA）法分析不同浓度唑来磷酸盐作用后成骨细胞对VEGF的分泌,得到的研究结果显示,唑来磷酸盐对成骨细胞增殖的抑制作用呈现一种剂量依赖性;不同浓度唑来磷酸盐处理后细胞内都有自噬蛋白的表达,其中10-8M浓度的唑来磷酸盐对自噬蛋白表达的诱导效果最为明显;唑来磷酸盐以一种剂量依赖性的方式抑制成骨细胞产生VEGF。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 引言
• 第2章 实验材料及研究方法
• 2.1 主要仪器、试剂与物品
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 MC3T3 细胞培养
• 2.2.2 MTT 法检测成骨细胞在不同药物浓度作用下的增殖情况
• 2.2.3 免疫组织化学染色
• 2.2.4 酶联免疫法分析成骨细胞在不同浓度药物的作用下对血管内皮生长因子的表达
• 2.2.5 统计学处理
• 第3章 实验结果
• 3.1 MTT 法检测成骨细胞在不同药物浓度作用下的增殖情况
• 3.2 在不同浓度唑来磷酸盐作用下成骨细胞中自噬蛋白BECLIN 1和 MAPLC3 的表达情况
• 3.3 不同浓度唑来磷酸盐作用下MC3T3 细胞对血管内皮生长因子的表达
• 第4章 讨论
• 4.1 双膦酸盐发挥药理作用的机制
• 4.2 双膦酸盐对于成骨细胞的作用
• 4.3 双膦酸盐的严重副作用——双膦酸盐引起的颌骨坏死
• 4.3.1 BRONJ 的临床表现
• 4.3.2 BRONJ 的发病机制
• 4.3.3 BRONJ 的治疗策略
• 4.4 自噬及矿化组织中的自噬
• 第5章 结论
• 参考文献
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果
• 致谢