猪肠道杯状病毒衣壳蛋白重组抗原的研制及应用

论文摘要

1猪肠道杯状病毒的分子流行病学调查从多个腹泻猪场共采集腹泻猪粪便189份,采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查。检出猪肠道杯状病毒阳性病料24份,阳性率为12.70%（24/189）。测序后与国外已发表的毒株比较,表明了我们所测定毒株的序列与猪肠道杯状病毒中猪札如病毒代表株Cowden最相近（同源性介于75.60%-88.3%之间）,证实了其均为猪札如病毒,首次发现该病毒存在于我国猪群中。但是未检测到猪肠道杯状病毒的另一个成员:猪诺如病毒。这是我国猪肠道杯状病毒的首次报道。2猪札如病毒衣壳蛋白基因的克隆与表达参照GenBank中猪札如病毒衣壳蛋白基因序列设计引物,从发病仔猪的腹泻粪便中扩增得到衣壳蛋白基因,经纯化、连接、转化,将其克隆到pMD18-T中,所克隆衣壳蛋白基因序列与GenBank中收录的其他猪札如病毒衣壳蛋白基因序列的同源性在81.3%-91.3%。另设计1对引物,利用基因工程方法将所克隆的衣壳蛋白的编码序列亚克隆到表达载体pET-28a（+）中,转化大肠杆菌Rosetta（DE3）获得表达重组菌。SDS-PAGE电泳及Western-blot分析表明重组菌在诱导后可以表达特异性的衣壳蛋白,该重组蛋白分子量约为61kDa,表达量占菌体总蛋白量的20%。3检测猪札如病毒抗体间接ELISA方法的初步建立及其应用以纯化的原核表达猪札如病毒衣壳蛋白为诊断抗原,建立了猪肠道杯状病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法。该抗原不与其他常见猪病（猪瘟、伪狂犬、蓝耳病、口蹄疫、圆环病毒病和传染性胃肠炎）的阳性血清发生交叉反应。用该法对湖南省各地区收集到的42份母猪和96份仔猪血清样品进行检测,阳性率分别为83.33%（35/42）和68.75%（66/96）。本研究建立的间接ELISA方法适于大规模的PEC血清流行病学调查。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 文献综述
• 猪肠道杯状病毒的研究进展
• 参考文献
• 第二章 实验研究
• 实验一 猪肠道杯状病毒的分子流行病学调查
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 实验二 猪札如病毒衣壳蛋白基因的克隆与表达
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 实验三 检测猪札如病毒抗体间接ELISA方法的初步建立及其应用
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 结论
• 附录
• 符号说明
• 致谢
• 作者简历