抗内毒素IgY-F（ab′）2的制备与体外生物学效应研究

论文摘要

烧伤后肠道三大屏障功能均有不同程度下降,包括肠粘膜机械屏障损害,出现粘膜糜烂及溃疡;肠道内固有菌群失调;全身免疫系统功能降低,肠腔内sIgA 水平下降。这些因素造成了肠腔内细菌和内毒素（lipopolysacchoride,LPS）进入血液循环,即细菌和LPS 移位,形成菌血症或内毒素血症（intestinal endotoxemia,ITEM）,这是导致全身性感染及多器官功能哀竭的重要原因之一,但目前尚无特别有效的拮抗LPS 的药物应用于临床。近年来,发现在鸡蛋的蛋黄中富含来源于鸡血清的免疫球蛋白（immunoglobulin G, IgG）,国际上命名为immunoglobulin yolk（IgY）,其含量远高于血清,且对相应的抗原有较强的拮抗作用。而IgY 含有F（ab′）2段和Fc 段,其中F（ab′）2段具有完全的抗体活性,而Fc 段可引起过敏反应。本研究旨在寻求一种既能有效拮抗LPS,又能减少过敏反应的新药。本研究用LPS 免疫纯系来亨（Leghorn）鸡,通过改良水溶法（water dissolve WD 法）从蛋黄中提取、纯化特异性抗内毒素免疫球蛋白IgY,再用胃蛋白酶将IgY 酶切为F（ab′）2段和Fc 段,Fc 段进一步被胃蛋白酶切为无功能的小分子片段,纯化抗内毒素IgY-F（ab′）2并对其生物学特性进行鉴定。光密度法检测抗内毒素IgY-F（ab′）2含量为1.04mg/mL 蛋黄液,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测抗内毒素IgY-F（ab′）2效价为1:25600,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量为24KD、纯度为90%,免疫印迹法（Western-blotting）测定其与鸡血清中的IgG有相同的抗原性。抗内毒素IgY-F（ab′）2系通过大肠埃希菌来源之LPS 免疫鸡制备,研究中培养了铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌四种临床常见致病菌,通过酚水法提取四种致病菌来源的LPS,通过内毒素定量检测证实大肠埃希菌来源之LPS免疫鸡制备之抗内毒素IgY-F（ab′）2对其他细菌（铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌）来源之LPS 均有拮抗作用,且当IgY-F（ab′）2剂量为0.5mg/mL LPS 时对其有较强的生物学效应。LPS 通过其活性中心脂质A（Lipid A）与效应细胞结合后,导致单核/巨噬细胞活化释放肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF-α）和白细胞介素（Interleukin,IL-6）等细

论文目录

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• 论文正文
• 前言
• 2 的制备'>第一部分 抗内毒素 IgY-F（ab′）₂的制备
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 2 鉴定'>第二部分 抗内毒素 IgY-F（ab′）₂鉴定
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 2 体外生物学效应'>第三部分 抗内毒素 IgY-F（ab′）₂体外生物学效应
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 全文结论
• 致谢
• 照片
• 参考文献
• 文献综述 IgY:一种特殊免疫球蛋白
• 参考文献
• 在读硕士期间论文发表情况