雷公藤防治哮喘气道重塑作用的分子机制研究

论文摘要

目的:研究前炎症因子白介素-1β（IL-1β）对气道上皮细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）的调控及雷公藤对其的保护作用,以探讨雷公藤在气道重塑中作用的分子机制。方法: （1）选择原代分离新西兰白兔气道上皮细胞（BEC）作为研究对象,体外培养,待细胞生长融合成片（细胞生长第5 天）进行处理。（2）将培养细胞按每皿一个处理组随机分4 组:对照组和IL-1β处理A、B、C 组。A、B、C 组分别加入终浓度为0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml的IL-1β,对照组加入等量无血清培养液,24 小时后收集细胞爬片并固定,原位杂交观察各组气道上皮细胞TGF-β1 mRNA 表达。（3）将培养细胞随机分5 组:对照组（加等量无血清培养液）、IL-1β处理组（加终浓度为10ng/ml 的IL-1β）、IL-1β+雷公藤共处理A、B、C 组（分别加入终浓度为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml 的雷公藤溶液预处理半小时后给予终浓度为10ng/ml 的IL-1β）, 24 小时后收集细胞爬片并固定,进行原位杂交和免疫细胞化学染色,观察各组TGF-β1 mRNA 和蛋白表达。（4）将培养细胞随机分4 组,对照组（加等量无血清培养液）、IL-1β处理组（加终浓度为10ng/ml 的IL-1β）、IL-1β+雷公藤共处理组（加入终浓度为10μg/ml 的雷公藤预处理半小时后再加入终浓度为10ng/ml 的IL-1β）、雷公藤处理组（加入终浓度为10μg/ml 的雷公藤）,24 小时后提取细胞总RNA,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察各组TGF-β1 mRNA 的表达。结果: （1）气道上皮细胞的形态和鉴定:倒置相差显微镜观察正常气道上皮细胞培养5 天后融合成片,呈铺路石样,培养7 天后部分细胞分化成柱状上皮,可见纤毛。苔盼兰染色检测细胞活力（%）达99%以上,免疫细胞化学染色细胞角蛋白染色阳性,胞浆成棕黄色,证实为气道上皮细胞。（2）IL-1β对TGF-β1 mRNA 表达的影响:IL-1β处理A、B、C 组均可见胞浆阳性表达,对照组胞浆内少见阳性表达。经图象分析显示IL-1β处理A 组（0.162±0.023）、B 组（0.318±0.013）、C 组（0.644±0.016）TGF-β1 mRNA

论文目录

• 摘要
• 前言
• 第一章 材料和方法
• 第二章 结果
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 综述
• 个人简历
• 致谢