青蒿琥酯对宫颈癌HeLa和Siha细胞裸鼠移植瘤放射增敏的实验研究

论文摘要

目的研究青蒿琥酯（Artesunate）对p53突变型宫颈癌HeLa细胞及p53野生型宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用,并探讨其作用机理的差异性,为青蒿琥酯作为肿瘤放疗增敏药物提供实验依据。方法分别以浓度为12×107个/ml及12×108个/ml的HeLa和Siha细胞悬液接种于裸鼠右大腿根部皮下建立宫颈癌HeLa和Siha细胞裸鼠移植瘤模型,待移植瘤平均体积增至大约（5mm×5mm×5mm）,随机分为:对照组、单药组（青蒿琥酯组）、单照组（10Gy）、药物+照射组（青蒿琥酯+10Gy）。对照组与单照组:每只裸鼠腹腔注射生理盐水每次0.2ml,1次/d,连续7d,单药组与药物+照射组每只裸鼠予以腹腔注射青蒿琥酯,将青蒿琥酯母液（50mg/ml）注射前用生理盐水稀释成10mg/ml,每只按100mg/kg/d量给予,每次0.2ml,1次/d,连续7d,第7d在给药结束后1h将单照组与药物+照射组移植瘤局部单次10Gy60Coγ射线照射,照后观察14d,14d后剥瘤,称瘤重,测量移植瘤体积,计算抑瘤率及肿瘤体积抑制率,绘制肿瘤生长曲线。流式细胞仪检测移植瘤细胞周期,Western Blot法检测移植瘤组织中cyclinB1、cdc2、wee1蛋白的表达,并对移植瘤标本进行苏木精-伊红染色,免疫组化S-P法测定移植瘤组织微血管密度（MVD）,TUNEL法检测移植瘤组织中肿瘤细胞凋亡。结果（1）HeLa细胞接种10-15天后可以成功地建立皮下移植瘤模型,成瘤率100%,Siha细胞接种15-20天后可以成功地建立皮下移植瘤模型,成瘤率100%;（2）青蒿琥酯对HeLa细胞裸鼠移植瘤有显著的放射增敏作用,药物+照射组瘤重（0.64±0.28）g明显低于单照组（1.31±0.44）g（P<0.05）,且抑瘤率67.67%高于单照组34.09%,差异显著;处理后移植瘤平均体积药物+照射组（579.18±120.36）mm3显著低于单照组（979.36±289.00）mm3（P<0.05）,肿瘤体积抑制率61.59%明显高于单照组35.05%;青蒿琥酯对Siha细胞裸鼠移植瘤无明显的放射增敏作用,药物+照射组瘤重（0.82±0.22）g及移植瘤平均体积（657.43±100.52）mm3同单照组瘤重（0.88±0.35）g及移植瘤平均体积（717.20±148.55）mm3相比,差异无统计学意义。（3）HE染色病理切片显示HeLa细胞裸鼠移植瘤药物+照射组细胞凋亡较单照组明显增多,而Siha细胞裸鼠移植瘤药物+照射组细胞凋亡同单照组相比无明显改变。（4）TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡结果显示,HeLa细胞裸鼠移植瘤药物+照射组肿瘤细胞凋亡指数（50.30±5.91）%较单照组（30.20±5.09）%显著增加（P<0.05）,而Siha细胞裸鼠移植瘤药物+照射组肿瘤细胞凋亡指数（38.80±5.25）%同单照组（36.60±5.52）%相比无明显改变。（5）免疫组化S-P法检测移植瘤标本微血管密度结果显示:对于HeLa细胞裸鼠移植瘤,药物+照射组移植瘤的微血管密度（9.75±2.99）显著低于单照组（24.25±5.74）（P<0.05）;对于Siha细胞裸鼠移植瘤,药物+照射组移植瘤的微血管密度（17.25±4.35）同单照组（20.25±4.27）相比无明显改变。（6）流式细胞仪检测细胞周期发现:HeLa细胞裸鼠移植瘤药物+照射组移植瘤细胞的G2/M期细胞比例（14.93±2.47）%较单照组移植瘤细胞的G2/M期细胞比例（28.17±4.58）%下降（P<0.05）,药物+照射组移植瘤细胞的G0/G1期细胞比例（50.84±1.12）%较单照组移植瘤细胞的G0/G1期细胞比例（41.32±3.84）%上升（P<0.05）,而Siha细胞裸鼠移植瘤细胞的G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例均无明显变化。（7）Western Blot检测发现,HeLa细胞裸鼠移植瘤药物+照射组cyclinB1蛋白表达水平较单照组明显升高,wee1蛋白表达水平较单照组明显降低,cdc2蛋白在各处理组中的表达与对照组无明显差异。Siha细胞裸鼠移植瘤药物+照射组cyclinB1、cdc2、wee1蛋白表达水平同单照组相比均无明显变化。结论（1）青蒿琥酯对p53突变型宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤具有放射增敏作用,能明显抑制60Coγ射线照射后HeLa细胞裸鼠移植瘤的生长,而对p53野生型Siha细胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用不明显;（2）青蒿琥酯能增强由60Coγ射线所诱导的p53突变型HeLa细胞裸鼠移植瘤的细胞凋亡,而对p53野生型Siha细胞裸鼠移植瘤不存在这种作用;（3）青蒿琥酯联合60Coγ射线能抑制p53突变型HeLa细胞裸鼠移植瘤的微血管生成,而对p53野生型Siha细胞裸鼠移植瘤受照后的微血管生成无影响;（4）青蒿琥酯能抑制p53突变型宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤因60Coγ射线照射所引起的G2/M期阻滞,而不影响p53野生型宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤照射后的细胞周期进程;（5）青蒿琥酯可通过对G2期调控关键因子cyclinB1、wee1蛋白的调节,抑制由射线诱导的移植瘤细胞G2/M期阻滞,发挥对p53突变型宫颈癌HeLa细胞移植瘤的放射增敏作用;（6）青蒿琥酯对60Coγ射线照射后宫颈癌HeLa和Siha细胞裸鼠移植瘤内cdc2蛋白表达水平均没有影响,提示青蒿琥酯可能通过wee1对cdc2间接发挥作用,而不是直接影响cdc2蛋白的表达水平;（7）青蒿琥酯可能是一种安全有效的放射增敏剂,在宫颈癌放射治疗中有应用前景,值得深入研究。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤模型的建立
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 青蒿琥酯对宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤放射增敏作用的研究
• 60Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤生长及病理形态学变化的影响'>（一） 青蒿琥酯对⁶⁰Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤生长及病理形态学变化的影响
• 60Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的影响'>（二） 青蒿琥酯对⁶⁰Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的影响
• 60Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤微血管密度的影响'>（三） 青蒿琥酯对⁶⁰Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤微血管密度的影响
• 第三部分 青蒿琥酯对宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤放射增敏机制的研究
• 60Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤细胞周期的影响'>（一） 青蒿琥酯对⁶⁰Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤细胞周期的影响
• 60Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤细胞周期蛋白cycli1181、cdc2 和wee1 表达水平的影响'>（二） 青蒿琥酯对⁶⁰Coγ线照射后宫颈癌HeLa 和Siha 细胞裸鼠移植瘤细胞周期蛋白cycli1181、cdc2 和wee1 表达水平的影响
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 发表论文及其它
• 一、硕士期间发表论文
• 二、参加的科研项目
• 致谢