鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白配体结合表位的鉴定

论文摘要

鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起雏鸡的一种高度接触性传染病,该病主要造成机体免疫器官——法氏囊损伤,导致免疫抑制,给养鸡业带来严重的经济损失。病毒感染细胞的本质是病毒表面吸附蛋白结合细胞受体,根据病毒受体结合配体表位,或病毒配体结合受体表位,寻找相应的抗病毒药靶,这样,病毒就不能进入细胞或被阻止于吸附细胞受体之前,切断病毒感染宿主细胞,起到抗病毒作用,此方法是成功抑制病毒感染的途径。本研究根据已报道的IBDV VP2蛋白的三维结构,设计合成了一系列VP2多肽,以鸡胚成纤维细胞(CEF)为靶细胞,进行多肽结合CEF细胞试验、病毒阻断多肽结合CEF细胞试验和多肽阻断IBDV感染CEF细胞试验。根据配体结合受体原理,运用免疫细胞组化技术和流式细胞检测技术,对IBDV VP2蛋白配体结合表位进行筛选和鉴定。结果:多肽结合CEF细胞试验筛选出一条IBDV VP2配体结合表位多肽P22,其氨基酸序列为CLQSNGNYKFDQMLGTAQNLPASYNYCRLVSRSL TVRSSTLPGG,此多肽在0.2mmol/L、0.1mmol/L和0.05mmol/L的浓度下可以结合CEF细胞;病毒阻断结合试验流式细胞仪检测结果显示,P22结合CEF的阳性细胞减少了26.5%,平均荧光强度降低了26.66,说明IBDV可以阻断P22结合CEF细胞;多肽阻断病毒感染试验发现P22具有抑制感染功能,在0.1mmol/L、0.05mmol/L和0.025 mmol /L时可以部分抑制IBDV感染CEF细胞,在0.2 mmol /L时可以完全抑制IBDV感染CEF细胞。结论:成功筛选出IBDV VP2蛋白配体结合表位多肽P22,并发现此多肽具有抑制IBDV感染CEF细胞的功能。本研究是国内外首次开展的IBDV配体结合表位的探索性研究,揭示了病毒与宿主细胞之间的相互作用,对深入了解IBDV感染细胞的分子机制有重要意义,同时也为IBDV靶标药物的设计开发提供新思路。

论文目录

• 致谢
• 中文摘要
• 第一章 文献综述
• 1 鸡传染性法氏囊病研究进展
• 1.1 IBDV 基因组结构
• 1.2 IBDV 的病毒蛋白及其功能
• 1.3 病毒的形态、结构、复制和繁殖
• 1.4 IBDV 的毒力及其标志
• 1.5 VP2 抗原结构分布与变异
• 1.6 IBDV 疫苗与免疫
• 2 病毒受体与配体的相互作用机制研究进展
• 2.1 病毒受体和病毒配体的概念
• 2.2 病毒受体和病毒配体的生物学功能及分类
• 2.3 病毒受体与病毒配体相互作用在治疗中的应用
• 2.4 研究病毒受体和病毒配体常用的生物学途径
• 2.5 研究病毒受体和病毒配体相互作用的意义
• 3 IBDV 受体与配体的研究进展
• 3.1 IBDV 受体的研究进展
• 3.2 IBDV 配体的研究进展
• 结语
• 引言
• 第二章 鸡传染性法氏囊病病毒VP2 蛋白配体结合表位的初步鉴定
• 摘要
• 引言
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 仪器设备
• 1.4 主要试剂配制
• 1.5 多肽的设计与合成
• 1.6 鸡胚成纤维细胞（CEF）的制备
• 1.7 病毒的感染、收获与毒力测定
• 1.8 鸡传染性法氏囊病毒感染比（MOI）的测定
• 1.9 病毒TCID50 的测定
• 1.10 Sulfo-NHS-Biotin 标记多肽
• 1.11 Pep-Biotin 与CEF 细胞结合试验
• 1.12 小鼠IgG 的提纯
• 1.13 多肽与小鼠IgG 偶联
• 1.14 流式细胞术分析多肽结合试验和病毒阻断试验
• 2 结果与分析
• 2.1 收获病毒抗原的测定
• 2.2 IBDV 感染比（MOI）的测定
• 2.3 病毒TCID50 的测定
• 2.4 P22-Biotin 与CEF 细胞结合试验
• 2.5 饱和硫酸铵法提纯moIgG
• 2.6 流式细胞术分析多肽结合试验和病毒阻断试验
• 3 结论与讨论
• 3.1 多肽的设计合成与检测
• 3.2 小鼠IgG 的提取和P22 偶联小鼠IgG
• 3.3 结合试验和病毒阻断结合试验
• 第三章 IBDV VP2 配体结合表位多肽抑制病毒感染CEF 细胞的研究
• 摘要
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 抑制感染试验
• 2 结果与分析
• 2.1 抑制感染试验
• 3 结论与讨论
• 3.1 筛选IBDV VP2 配体结合表位的目的和意义
• 3.2 抑制试验
• 3.3 IBDV VP2 配体结合表位多肽的抑制功效
• 3.4 多肽类药物的研究与应用
• 4 全文结论
• 参考文献
• 英文摘要
• 英文缩略表
• 攻读学位期间发表的论文