鲍鱼内脏甾醇的提取、分离和鉴定

论文摘要

近年来鲍鱼养殖业大力发展,占鲍鱼质量1/5的下脚料却被大量的丢弃,这不仅污染了环境,同时也造成了资源的极大浪费。鲍鱼下脚料中含有大量的油脂、多糖、蛋白质等营养物质,可再利用的价值非常高。鉴于对鲍鱼内脏甾醇类化合物的研究较少,本文以鲍鱼内脏为研究对象,研究鲍鱼内脏甾醇的提取分离工艺,对比了PEF技术跟索氏提取法提取油脂对甾醇产量的影响,并对甾醇样品进行分析鉴定,用HPLC法测定了其中胆甾醇的含量。本文主要获得以下研究结果：（1）鲍鱼内脏油脂的提取工艺：采用高压脉冲电场法提取鲍鱼内脏油脂,通过对PEF提取鲍鱼内脏油脂的单因素实验,确定了单因素的优化条件范围,然后进行正交实验。PEF提取鲍鱼内脏油脂中的三个参数对油脂得率的影响依次为：电场强度>脉冲频率>脉冲个数,其最佳的提取工艺为：电场强度为30 kV/cm,脉冲个数为8个,脉冲频率为2700 Hz。（2）鲍鱼内脏甾醇的提取分离工艺：采用皂化和溶剂萃取结晶的方法从鲍鱼内脏油脂中提取鲍鱼内脏甾醇,鲍鱼内脏油脂用KOH-乙醇溶液皂化,不皂化物用石油醚萃取,旋转蒸发浓缩,干燥得甾醇粗品,后用乙醇重结晶,得精制的甾醇。此工艺中,皂化过程的最佳参数为：液料比为40：1,反应时间3h,皂化温度75℃,萃取剂用量为110mL,提取1次。结晶过程的最佳参数为：液料比为15：1,结晶温度为4℃,时间为24h。比较了用不同方法提取鲍鱼内脏油脂对甾醇产量的影响,得出PEF技术提取的鲍鱼内脏甾醇含量较索氏提取法提取的鲍鱼内脏甾醇含量高,进一步验证了PEF技术提取活性物质的可行性。（3）对鲍鱼内脏甾醇进行分析鉴定,确定其化合物结构。对鲍鱼内脏甾醇样品进行化学试剂特征显色法初步鉴定,符合特征显色,初步认为样品中含有甾醇。利用GC-MS对甾醇样品进行检测,与标准谱库比对后确定甾醇主要为胆甾醇。对鲍鱼内脏甾醇样品进行红外光谱分析,得到的甾醇特征峰清晰明确。采用HPLC测定鲍鱼内脏中胆甾醇的含量,方法简便,出峰时间短,精密度实验和回收率实验均较满意。测得的胆甾醇含量为：5mL鲍鱼内脏油脂中含有176.9mg的胆甾醇。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 鲍鱼内脏的综合利用
• 1.1 鲍鱼内脏的营养价值
• 1.2 鲍鱼内脏的开发现状
• 1.3 高压脉冲电场提取鲍鱼脏器油脂
• 1.3.1 高压脉冲电场的概述
• 1.3.2 高压脉冲电场的应用
• 1.3.3 高压脉冲电场提取油脂的研究
• 1.4 甾醇类化合物概述
• 1.4.1 甾醇类化合物介绍
• 1.4.2 甾醇的分类
• 1.4.3 甾醇提取工艺
• 1.4.4 甾醇分析方法
• 1.4.5 甾醇的生理功能
• 1.4.6 胆甾醇的功能
• 1.5 立体背景及意义
• 1.6 本课题研究的主要内容
• 第二章 PEF提取鲍鱼内脏油脂
• 1 实验材料与仪器
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器及设备
• 1.2.1 PEF设备
• 1.2.2 其他实验设备
• 2 实验方法
• 2.1 PEF提取鲍鱼内脏油脂工艺流程
• 2.2 油脂得率公式
• 2.3 PEF提取油脂的最佳工艺参数的确定
• 2.3.1 电场强度对油脂得率的影响
• 2.3.2 脉冲个数对油脂得率的影响
• 2.3.3 脉冲频率对油脂得率的影响
• 3 结果与分析
• 3.1 鲍鱼内脏营养成分
• 3.2 电场强度对鲍鱼内脏油脂得率的影响
• 3.3 脉冲个数对鲍鱼内脏油脂得率的影响
• 3.4 脉冲频率对鲍鱼内脏油脂得率的影响
• 3.5 PEF提取鲍鱼内脏油脂各因素间的相互关系
• 4 本章小结
• 第三章 鲍鱼内脏油脂中甾醇的提取与分离
• 1 材料与仪器
• 1.1 试验材料和主要试剂
• 1.2 试验主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 药品配制
• 2.2 鲍鱼内脏粗甾醇的提取
• 2.3 甾醇含量测定
• 2.3.1 胆甾醇标准溶液的配制
• 2.3.2 最大吸收波长的确定
• 2.3.3 胆甾醇标准曲线的绘制
• 2.4 皂化萃取过程单因素实验方案设计
• 2.4.1 液料比对鲍鱼内脏甾醇产量的影响
• 2.4.2 皂化温度对鲍鱼内脏甾醇产量的影响
• 2.4.3 皂化时间对鲍鱼内脏甾醇产量的影响
• 2.4.4 萃取剂用量对鲍鱼内脏甾醇产量的影响
• 2.4.5 萃取次数对鲍鱼内脏油脂中甾醇产量的影响
• 2.5 粗甾醇的精制
• 2.5.1 重结晶溶剂的选择
• 2.5.2 重结晶中相关公式
• 2.5.3 重结晶单因素实验
• 2.6 不同方法提取鲍鱼内脏油脂对甾醇得率的影响
• 3 结果与分析
• 3.1 从鲍鱼内脏油脂中提取甾醇单因素初步实验
• 3.1.1 液料比对鲍鱼内脏甾醇产量的影响
• 3.1.2 皂化温度对鲍鱼内脏甾醇产量的影响
• 3.1.3 皂化时间对鲍鱼内脏甾醇产量的影响
• 3.1.4 萃取剂用量对鲍鱼内脏甾醇产量的影响
• 3.1.5 萃取次数对鲍鱼内脏甾醇产量的影响
• 3.2 响应面优化实验
• 3.2.1 响应面实验方案设计
• 3.2.2 实验结果分析
• 3.2.3 响应面交互作用等高线分析
• 3.2.4 最优工艺求解
• 3.3 鲍鱼内脏甾醇的纯化
• 3.3.1 重结晶溶剂的选择
• 3.3.2 单因素实验结果
• 3.3.3 正交试验
• 3.4 不同方法提取鲍鱼内脏油脂对甾醇产量的影响
• 4 本章小结
• 第四章 鲍鱼内脏甾醇的分析鉴定及胆甾醇含量的测定
• 1 主要试剂、仪器及研究方法
• 1.1 试验材料及主要试剂
• 1.1.1 试验材料
• 1.1.2 主要试剂
• 1.2 主要仪器
• 1.3 试验方法
• 1.3.1 化学试剂特征显色法
• 1.3.2 GC-MS检测
• 1.3.3 鲍鱼内脏甾醇的红外光谱分析
• 1.3.4 HPLC测定鲍鱼内脏油脂中胆甾醇的含量
• 2 结果与分析
• 2.1 化学试剂特征显色法
• 2.2 GC-MS分析
• 2.3 鲍鱼内脏甾醇的红外光谱分析
• 2.4 HPLC测定鲍鱼内脏油脂中胆固醇的含量
• 2.4.1 胆甾醇色谱图
• 2.4.2 标准曲线和检测限
• 2.4.3 精密度试验
• 2.4.4 回收率实验
• 3 本章小结
• 第五章 总结
• 1 主要结论
• 2 特色与创新点
• 3 展望
• 参考文献
• 致谢