A549核因子-κB和肿瘤坏死因子在香烟烟雾提取物刺激及阿奇霉素干预下的变化

论文摘要

目的:观察香烟烟雾提取物（CSE）对肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549）活性、核因子-κB（NF-κB）的诱导及对肿瘤坏死因子（TNFα）水平的影响;探讨阿奇霉素对CSE导致的A549 NF-κB活化和TNFα分泌的影响。方法:体外培养A549,在空白对照、5%、10%、20%、30%、50%不同浓度的CSE刺激后,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、免疫组化染色和酶联免疫法（ELASA）检测A549活性、NF-κB活化和TNFα水平的变化。10%CSE加入阿奇霉素干预后,再次检测A549NF-κB活化和TNFα水平的变化。结果:MTT检测结果显示:与对照组相比,CSE各组细胞活性具有统计学差异（P<0.01）;不同浓度CSE刺激后均可诱导NF-κB的活化,且在8h达高峰;各组TNFα水平具有时间依赖性,与对照组相比,5%和10%CSE组上升,而20%CSE组下降（P均<0.01）;10%CSE刺激8小时后可诱导NF-κB活化及分泌TNFα增多;10%CSE+阿奇霉素组细胞NF-κB染色则相对变浅,TNFα分泌有所减少（P<0.01）。结论:CSE可导致A549活性下降、NF-κB活化和TNFα水平变化;阿奇霉素可部分抑制CSE刺激A549的NF-κB活化,减少TNFα的分泌,阻断NF-κB与TNFα形成的恶性循环。从抑制炎症介质失控性释放的角度出发,推测阿奇霉素可能会在治疗慢性阻塞性肺疾患、哮喘等肺部疾病中起重要作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料和方法
• 1. 主要仪器和设备
• 2. 主要试剂及配制
• 2.1 细胞培养的主要试剂及配制
• 2.2 香烟烟雾提取物（cigarette smoke extraet，ESE）制备
• 2.3 MTT试剂
• 2.4 阿奇霉素
• 2.5 免疫组化相关试剂
• 2.6 TNF-α酶联免疫法（ELISA）试剂盒
• 3. 观察内容
• 3.1 细胞培养
• 3.2 四甲基偶氮唑蓝（MTT）试验
• 3.3 免疫组织化学染色
• 3.4 培养上清液 TNF α ELISA的测定
• 3.5 统计分析
• 结果
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文