论文摘要
研究背景:柳叶蜡梅是畲乡民间应用最广泛的中草药之一,民间用于肠胃不适及腹部胀痛等消化道疾病,现已被开发成山蜡梅叶颗粒和脾胃舒胶囊及保健茶等。脾胃舒胶囊在临床观察中发现对部分癌症化疗时的辅助治疗临床效果明显,因此我们推测柳叶蜡梅具有抗肿瘤作用。研究目的:研究柳叶蜡梅提取物对人宫颈癌HeLa细胞的生长抑制作用,从细胞周期和细胞凋亡两方面来考察细胞生长抑制及其可能机制。研究方法:应用噻唑蓝（MTT）比色法、流式细胞定量检测、透射电镜、Hoechst33258/PI染色、DNA电泳、RT-PCR和Western印迹检测等技术研究柳叶蜡梅提取物对HeLa细胞的增殖、细胞周期分布、凋亡以及p21 mRNA水平和蛋白表达变化的情况。研究结果:（1）细胞生长抑制实验结果显示:a)溶剂吐温-80对HeLa细胞的生长作用影响不大,与空白对照组比较无显著性差异（P＞0.05）;b)柳叶蜡梅提取物可明显抑制HeLa细胞生长,随着药物浓度的增加,呈剂量依赖性;c)柳叶蜡梅提取物对FL细胞生长抑制作用较小,与HeLa细胞的存活率相比具有显著性差异;d)柳叶蜡梅含药血清对HeLa细胞的增殖有抑制作用;（2）细胞周期检测显示柳叶蜡梅提取物可阻滞HeLa细胞于G2/M期;（3）透射电镜观察显示,药物处理组细胞表面微绒毛减少、染色质浓缩边集,并见凋亡小体;（4）细胞核经Hoechst33258染色颗粒状荧光,而PI染色无红色荧光,即无坏死现象;（5）琼脂糖凝胶电泳显示细胞凋亡典型的DNA ladder条带;（6）RT-PCR检测显示p21 mRNA表达水平增高,并随着药物浓度的增加条带逐渐变粗;（7）Western印迹显示P21蛋白表达上调。结论:柳叶蜡梅提取物能够抑制HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡。本实验首次研究了柳叶蜡梅提取物的抗肿瘤作用,为天然药物柳叶蜡梅的进一步开发利用提供实验依据。
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