标定了花药特异启动子的tritordeum的筛选及遗传分析

论文摘要

外源基因定位表达的实现,依赖于启动子的合理调控,特别是一些花药组织特异性启动子,是创造作物雄性不育系及恢复系的关键因素。本论文从一批使用无启动子uidA 转化策略转化的tritordeum 中,分离出了标定有花药组织特异性启动子的单株并考察了其外源基因的遗传稳定性,为即将开展的启动子分离工作奠定了准确坚实的基础,取得了如下结果: 1)对转基因材料不同生长时期的不同组织进行Gus 组织化学检测,分析了植株中Gus 表达的时空特异性,应用RT-PCR 从转录水平进一步确证了启动子的特异性,所筛选出的单株中,Gus 的表达特异性和T0代表现完全一样,只限于花药原基和花粉粒部位。2)整合位点在各代之间传递的频率较低,即绝大部分子代中外源Gus 拷贝发生完全缺失,明显不符合显性:隐性（3:1）规律,但Gus 的表达特异性在各代之间传递时有着极强的遗传稳定性,这说明了此转基因麦类虽然经历了多次传代,但其内源性启动子的结构完整、功能正常。3)外源基因插入到作物内源启动子的后面,使得与配子发育或授粉过程相关基因的功能受到抑制,从而导致配子发育异常,或配子暂能正常发育完成,但随后进行授粉后,一些过程如涉及合子细胞分裂、特异细胞分化或组织器官形成等受到影响,以至于无法获得此转基因的纯合体。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 国内外小麦的生产状况
• 1.2 tritordeum 的遗传背景
• 1.3 基因工程用于小麦分子育种的研究
• 1.4 外源基因在转基因植株中的表达与稳定性
• 1.5 重要植物花药组织特异性启动子的国内外研究现状
• 1.6 无启动子转化策略用于标定作物内源性调控序列
• 1.7 本课题研究的目的和意义
• 2 转基因tritordeum 阳性植株的筛选
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果与分析
• 2.3 讨论
• 3 阳性单株子代中外源Gus 基因的遗传及表达研究
• 3.1 外源基因整合位点的遗传稳定性分析
• 3.2 外源基因的表达时空特异性在传代时的稳定性分析
• 3.3 外源Gus 转录水平的研究
• 4 总结与展望
• 4.1 总结
• 4.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文目录