稳定高表达HSPB1对大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用研究

论文摘要

目的:克隆和重组人心肌热休克蛋白B1（heat shock protein B1,HSPB1）基因,观察HSPB1高表达对大鼠心肌细胞氧化应激的保护作用并阐明其可能机制。 方法:1.将RT-PCR获得的人心肌HSPB1基因全长cDNA,重组入真核表达载体pCDNA3.1+。2.将重组体pCDNA3.1+/HSPB1瞬时转染293T细胞株进行真核表达活性测定,随后转染大鼠心肌细胞系H9c2,经G418选择性培养获得稳定转染细胞系。3.以稳定转染细胞系H9c2（HSPB1 H9c2）和空载体转染的H9c2（CON）为实验对象,不同浓度H2O2刺激后,倒置光学显微镜观察细胞形态学变化,并观察HSPB1高表达对高浓度H2O2诱导的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放的影响和低浓度H2O2诱导的细胞凋亡的影响。4.用荧光探针DCFH-DA和JC-1分别检测HSPB1 H9c2和CON细胞中内源性活性氧自由基产生的量及线粒体内膜跨膜电位水平。 结果:1.成功构建重组体pCDNA3.1+/HSPB1,经酶切分析,得到含有630bp目的条带的阳性克隆。2.Western Blot显示:pCDNA3.1+/HSPB1在293T和H9c2中表达良好。3.HSPB1高表达

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 HSPB1基因的克隆、重组和表达
• 人心肌HSPB1基因克隆、重组和鉴定
• 在大鼠心肌细胞系H9c2中稳定高表达HSPB1
• 第二部分 HSPB1对大鼠心肌细胞过氧化损伤的保护作用
• 2O₂引起的形态学改变'>HSPB1稳定高表达减少H₂O₂引起的形态学改变
• 2O₂引起的损伤性LDH释放'>HSPB1稳定高表达减少高剂量H₂O₂引起的损伤性LDH释放
• 2O₂引起的细胞凋亡'>HSPB1稳定高表达减少低剂量H₂O₂引起的细胞凋亡
• HSPB1稳定高表达减少内源性活性氧的产生
• 2O₂诱导的线粒体膜电位丧失'>HSPB1稳定高表达减轻H₂O₂诱导的线粒体膜电位丧失
• 小结
• 参考文献
• 致谢
• 综述及参考文献
• 在读期间发表的相关文章
• 论文独创性声明
• 论文使用授权声明