论文摘要
目的：孕期弓形虫感染可通过胎盘垂直传播导致流产、早产等不良妊娠结局的发生,胎盘局部的多种T淋巴细胞亚群对维持正常妊娠发挥非常重要的作用。已有研究证实,在弓形虫感染的小鼠体内,脾脏Treg细胞的数量是下降的；Th17细胞在弓形虫感染致不良妊娠中的作用机制研究未见报道。本文拟通过建立早孕期弓形虫感染的小鼠动物模型,检测弓形虫感染的孕鼠脾脏、胎盘中Treg与Th17细胞的变化,并分析Treg/Th17平衡状态与不良妊娠结局的关系。方法：建立小鼠早孕期弓形虫感染动物模型,适时处死小鼠,记录妊娠结局；取孕鼠脾脏和胎盘组织,流式细胞术检测脾脏和胎盘Treg和Th17细胞的数量变化；实时荧光定量PCR检测胎盘Foxp3、TGF-β, RORγt、IL-17和IL-6 mRNA的表达水平；制备胎盘组织上清,ELISA检测胎盘TGF-β和IL-17蛋白表达水平。结果：①妊娠结局的改变。正常组活胎数45只,死胎数2只,死胎率0.4%;而感染组活胎数3只,死胎数50只,死胎率94.3%。感染组死胎率明显高于对照组,差异显著（P<0.001）。②Treg细胞在脾脏和胎盘中的数量变化。脾脏中,感染组Treg占脾细胞总数的百分比和占CD4+细胞的百分比分别是（0.19±0.13）%和（20.30±6.37）%,对照组分别是（0.55±0.46）%和（37.16±21.34）%,两组两者比较均有显著性差异（P<0.01,P<0.01）；胎盘中,感染组Treg占胎盘细胞总数的百分比和占CD4+细胞的百分比分别是（0.55±0.52）%和（34.49±12.71）%,对照组分别是（0.31±0.39）%和（56.89±17.10）%,两组两者比较均有显著性差异（P<0.05,P<0.05）；在感染组,胎盘中Treg占CD4+细胞的百分比明显高于脾脏（P<0.05）。③Th17细胞在脾脏和胎盘中的数量变化。脾脏中,感染组Thl7占脾细胞总数的百分比和占CD4+细胞的百分比分别是（0.36±0.12）%和（29.39±9.29）%,较对照组（0.18±0.12）%和（12.39±8.40）%有升高,但差异无显著性。胎盘中,感染组Th17占胎盘细胞总数的百分比和占CD4+细胞的百分比分别是（0.54±0.34）%和（46.62±16.51）%,对照组分别是（0.08±0.07）%和（14.44±7.43）%,两组两者比较均有显著性差异（P<0.05,P<0.05）。在感染组,胎盘中Th17占CD4+细胞的百分比分别明显高于脾脏（P<0.05）。④胎盘IL-6、RORγt和Foxp3 mRNA的相对表达水平,在感染组为0.61±0.09、0.79±0.48、0.50±0.09,对照组0.45±0.09、0.37±0.16、0.61±0.12,两组三者相比均有显著性差异（P<0.05,P<0.05,P<0.05）⑤胎盘IL-17和TGF-βmRNA及蛋白表达水平,感染组IL-17和TGF-βmRNA相对表达水平分别为1.00±0.27、0.057±0.023,对照组0.63±0.28、0.10±0.04,两组两者相比均有显著性差异（P<0.05,P<0.05）。对照组IL-17和TGF-β蛋白表达水平分别为16.03±5.82 pg/ml、62.14±11.02pg/ml,感染组45.06±10.68 pg/m; 22.92±6.01 pg/ml,两组两者相比差异均有显著性（P<0.05,P<0.05）。⑥胎盘和脾脏中Treg/Th17的比值,感染组0.368±0.086、0.323±0.065,显著低于对照组3.276±0.872、3.507±1.133（P<0.05,P<0.05）。感染组TGF-β/IL-17（pr.）、TGF-β/IL-17 （mRNA）、Foxp3/RORγt（mRNA）比值（0.409±0.113、0.051±0.031、0.697±0.225）均显著低于对照组（3.076±1.024、0.185±0.081、2.218±0.701）（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。结论：可知,早孕期弓形虫感染可使胎盘局部Treg细胞及其相关因子TGF-β和Foxp3水平下降,使Th17及其相关因子IL-17、IL-6和RORγt水平升高,从而打破维持正常妊娠的免疫耐受状态,造成不良妊娠结局的发生。该研究结果对孕期弓形虫感染造成不良妊娠结局的分子免疫机制有了初步认识,为有效预防先天性弓形虫病的发生提供坚实的理论依据,将对提高人口出生质量及优生优育产生深远影响。