CTLA4-FasL融合蛋白抑制小鼠角膜移植免疫排斥反应的实验研究

论文摘要

目的:探讨CTLA4-FasL双功能蛋白预防小鼠角膜移植术后免疫排斥反应的疗效。方法:供体为C57BL/6小鼠,受体为BALB/b小鼠,分为5组。A组 空白对照组（20只）,B组0.1ug/mL CTLA4-FasL蛋白浸泡植片组（8只）,C组1ug/mLCTLA4-FasL蛋白浸泡植片组（8只）,D组10ug/mL CTLA4-FasL蛋白浸泡植片组（16只）,E组20ug/mL CTLA4-FasL蛋白浸泡植片组（8只）。术后定期观察角膜植片的存活情况。分别在术后不同时间进行普通病理学、免疫组织化学、逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）、DNA原位缺口末端标记（TUNEL）检查。结果:A组 角膜植片存活时间平均为16.3±1.5天,B组角膜植片存活时间平均为15.2±2.1天,C组角膜植片存活时间平均为14.6±1.2天,D组角膜植片存活时间超过90天,E组角膜植片存活时间平均为12.9±3.2天。D组与其他各组相比,角膜植片的存活时间显著延长,最长时间超过120天（P<0.01）。组织病理检查发现术后7天时各组角膜植片中散在大量的炎性细胞和淋巴细胞,角膜基质水肿;14天时D组角膜植片中炎性细胞的数量明显减少,A组仍见大量的浸润细胞;免疫荧光检查可见A组中发生排斥的角膜植片中可见CD4分子阳性表达,虹膜组织中有大量CD80表达,未见IL-10、IL-12表达;其他各组中角膜植片中可见CD4分子表达,未见CD80、IL-10、IL-12。RT-PCR结果显示A组中发生排斥的虹膜组织中CD80和CD86mRNA表达;D组角膜及虹膜组织中未检测到CD80和CD86的表达;A组发生排斥的角膜组织中可检测到Fas mRNA的表达,D组角膜组织中未检测到Fas mRNA的表达,E组发生混浊的晶状体中未检测Fas mRNA的表达,而正常晶状体中有Fas mRNA的表达。TUNEL检查可见A组发生排斥的角膜植片中偶见凋亡细胞的表达,而B组和C组中角膜植片中凋亡细胞的数量较A组未见明显增加,D组和E组中角膜植片中则散在大量的凋亡细胞。结论:10ug/mL CTLA4-FasL双功能融合蛋白能够明显延长角膜植片的存活时间。浓度低于10ug/mLCTLA4-FasL蛋白不能预防角膜移植术后免疫排斥的发生;高于10ug/mLCTLA4-FasL蛋白可能诱发角膜溶解,并发白内障等毒性作用。

论文目录

• 引言
• 第一章 材料和方法
• 1.1 CTLA4-FasL融合蛋白的制备
• 1.2 小鼠穿透性角膜移植动物模型建立
• 1.3 实验室检查方法
• 第二章 结果
• 2.1 临床观察
• 2.2 实验室检查结果
• 第三章 讨论
• 3.1 小鼠角膜移植模型
• 3.2 CTLA4-FasL双功能蛋白的作用机理
• 3.3 CTLA4-FasL双功能蛋白的疗效
• 3.4 CTLA4-FasL双功能蛋白的毒性作用
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 文献综述
• 附录
• 课题图片
• 致谢
• 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明