论文摘要
【目的】本课题通过分析人肺腺癌细胞系经化疗药物作用后侧群（side population,SP）细胞的比例变化,以及利用免疫磁珠分选出耐药人肺腺癌细胞系中ABCG2+细胞并进行裸鼠移植瘤实验,初步探讨人肺腺癌干细胞样细胞的分选方法及其基本生物学特性。【方法】以小剂量阿霉素（Adriamycin,ADM）诱导人肺腺癌A549细胞系和SPC-A-1细胞系,比较亲代细胞和诱导后细胞的形态;绘制两系细胞诱导前后的增殖曲线,计算倍增时间;用MTT比色法检测多种化疗药物对肿瘤细胞增殖的杀伤效应;显微镜下测定诱导前后两系细胞中SP细胞比例。以ADM诱导后的人肺腺癌SPC-A-1细胞系为研究对象,利用免疫磁珠分选出SPC-A-1/ADM细胞系中ABCG2+细胞和ABCG2-细胞,分别进行流式细胞分析及裸鼠体内移植,分析ABCG2+细胞和ABCG2-细胞的体内成瘤性。【结果】1.ADM诱导前后人肺腺癌细胞系的群体体外倍增时间和ADM诱导后人肺腺癌细胞系的耐药指数ADM诱导前后A549细胞的群体体外倍增时间分别为37.6h和36.1h,并无显著差异（P=0.989,t=0.013）。A549/ADM细胞对ADM、顺铂、长春新碱、足叶乙甙、紫杉醇五种药物的耐药指数分别为9.588、6.348、1.736、11.213、4.333。ADM诱导前后SPC-A-1细胞的群体体外倍增时间分别为35.9h和35.6h,并无显著差异（P=0.956,t=0.056）。SPC-A-1/ADM细胞对ADM、顺铂、长春新碱、足叶乙甙、紫杉醇五种药物的耐药指数分别为4.283、3.672、6.308、9.112、2.716。2.ADM诱导前后人肺腺癌细胞系中SP细胞比例变化ADM诱导前后,A549细胞中SP细胞的比例分别为4%和45%,差别显著（X2=307.210,p=0.000）;SPC-A-1细胞中SP细胞的比例分别为1%和10%,差别显著（X2=102.201,p=0.000）。3.培养SPC-A-1和SPC-A-1/ADM细胞中ABCG2+细胞的比例变化ABCG2染色荧光观察显示,在SPC-A-1/ADM细胞中,每个视野均可见被Mouse Anti-Human ABCG2/BCRP-FITC标记的细胞,ABCG2+细胞数量较SPC-A-1细胞中明显增多。流式细胞分析结果显示,SPC-A-1细胞空白对照组中ABCG2+细胞比例为0.047% ,同型对照组中ABCG2 +细胞比例为0.087 % , Mouse Anti-Human ABCG2/BCRP-FITC标记的SPC-A-1细胞中ABCG2+细胞比例为0.247%,而Mouse Anti-Human ABCG2/BCRP-FITC标记的SPC-A-1/ADM细胞中ABCG2+细胞比例达到9.9%,是SPC-A-1细胞中ABCG2+细胞比例的40.08倍。4.从SPC-A-1/ADM细胞中免疫磁珠分选ABCG2+细胞的得率及ABCG2+细胞的比例变化结果显示,从SPC-A-1/ADM细胞中,每1×107个细胞可分离出2×104个ABCG2+细胞,ABCG2+细胞得率为0.2%。A群细胞中Mouse Anti-Human ABCG2/BCRP-FITC标记阳性率为0.127%,B群细胞中Mouse Anti-Human ABCG2/BCRP-FITC标记阳性率为84.71%,是A群细胞中Mouse Anti-Human ABCG2/BCRP-FITC标记阳性率的667t倍。5.A群和B群人肺腺癌细胞的裸鼠体内成瘤能力比较接种SPC-A-1细胞和A群细胞的裸鼠未见成瘤,成瘤率分别为0/4、0/4。接种B群细胞的裸鼠3周后开始成瘤,第8周时,共有3只裸鼠成瘤,成瘤率为3/4。【结论】1.人肺腺癌A549和SPC-A-1细胞系经过ADM诱导后对多种化疗药物的耐药性明显增加,耐药细胞中SP细胞的比例显著升高,提示SP细胞比例增加与肺腺癌的耐药性形成密切相关。2.SPC-A-1/ADM细胞群中ABCG2表达阳性率显著高于SPC-A-1细胞,这为基于ABCG2来分离干细胞创造了条件。3.SPC-A-1/ADM细胞群中的ABCG2+细胞裸鼠体内移植成瘤率较高,而ABCG2-细胞和SPC-A-1细胞在裸鼠体内未见移植瘤形成,表明基于ABCG2所分离的肺腺癌细胞具有干细胞特性。
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- [20].ABCG2在非小细胞肺癌厄洛替尼耐药中的作用[J]. 第三军医大学学报 2014(10)
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- [29].肝细胞癌中ABCG2的表达及其临床意义[J]. 临床与实验病理学杂志 2014(01)
- [30].ABCG2的基因多态性与痛风危险性的关系[J]. 上海医药 2014(15)