论文摘要
目的观察氧化苦参碱（oxymatrine, OMT）的镇痛作用并探讨OMT镇痛作用涉及的部位及其相关机制。方法1.行为药理学方法①采用化学刺激/物理刺激疼痛模型（小鼠醋酸扭体法、小鼠福尔马林法、温浴热水缩尾法）,分别测定小鼠痛阈,观察氧化苦参碱对小鼠痛阈的影响;②采用小鼠S形竖尾实验和纳洛酮催瘾实验,观察小鼠S形竖尾反应和跳跃反应,分析氧化苦参碱在有效镇痛剂量下是否具有成瘾性;③采用小鼠温浴热水缩尾法,观察连续5d给予氧化苦参碱对小鼠的缩尾反射潜伏期的影响,分析小鼠是否对氧化苦参碱产生耐药性;④通过不同给药途径（腹腔注射、侧脑室注射和鞘内注射）,采用小鼠温浴热缩尾法,观察氧化苦参碱对小鼠缩尾反射潜伏期的影响,分析不同给药途径对氧化苦参碱镇痛作用效果的影响;⑤借助γ-氨基丁酸（gamma -aminobutyric acid, GABA）、GABA合成酶抑制剂、GABA合成释放抑制剂以及GABAA受体激动剂和拮抗剂等工具药研究其对氧化苦参碱镇痛作用的影响并初步分析氧化苦参碱镇痛作用的机制。2.应用免疫组织化学技术,检测氧化苦参碱对小鼠大脑皮层、丘脑、海马和脊髓背角处GABAA受体免疫阳性细胞的影响,初步定性半定量分析其镇痛作用与中枢GABAA受体的关系。3.应用Western blot技术,检测氧化苦参碱对福尔马林致痛小鼠大脑皮层和脊髓背角中GABAA受体蛋白表达的影响,进一步定量分析氧化苦参碱镇痛作用与大脑皮层和脊髓背角处GABAA受体的关系。结果1.氧化苦参碱对不同疼痛模型的镇痛作用腹腔注射氧化苦参碱180、90和45mg/kg均可抑制冰醋酸诱发的小鼠扭体反应,最大抑制率可达97.31%;可明显抑制小鼠福尔马林实验两相反应累计舔足时间（P<0.05、0.01） ;可延长小鼠温浴缩尾反应潜伏期（P<0.01）且作用效果可以维持90分钟以上。提示氧化苦参碱具有明显的镇痛作用。2.氧化苦参碱的成瘾性及耐药性观察在小鼠S形竖尾实验和纳洛酮催瘾实验中,氧化苦参碱组小鼠无竖尾反应和跳跃反应;给予小鼠氧化苦参碱180、90、45mg/kg,给药后30min测小鼠温浴缩尾反射潜伏期,连续5d,小鼠温浴热缩尾反射潜伏期未见显著性差异P﹥0.05。提示氧化苦参碱在镇痛作用剂量下无成瘾性和耐药性。3.氧化苦参碱的镇痛作用部位研究侧脑室注射氧化苦参碱4、2和1mg/kg可延长小鼠温浴热缩尾反应潜伏期（P<0.01）,作用效果可持续90分钟以上,最大痛阈提高率可达85.64%;鞘内注射氧化苦参碱8、4和2mg/kg同样表现出明显的镇痛效果（P<0.05,P<0.01）,作用效果可持续60分钟以上,最大痛阈提高率为76.59%。提示氧化苦参碱镇痛作用部位涉及脊髓水平和脊上水平。4.氧化苦参碱与GABA相关工具药合用对其镇痛作用的影响侧脑室注射GABA 2mg/kg和GABA合成酶抑制剂L-烯丙基甘氨酸（L-allylglycine ,L-AG）2.5mg/kg可分别加强阈下剂量氧化苦参碱（25mg/kg,ip）对温浴致痛小鼠的缩尾反射潜伏期（P<0.01）;侧脑室注射GABAA受体特异性抑制剂荷包牡丹碱（Bicuculine,BIC）4×10-3mg/kg和GABAA受体非特异性抑制剂印防己毒素（Picrotoxin,PTX）8×10-3mg/kg对阈下剂量氧化苦参碱（25mg/ kg）的镇痛作用也有类似的影响（P<0.01）。腹腔注射阈下剂量3-MP （12.18 mg/kg）能对抗氧化苦参碱180 mg/kg的镇痛作用（P<0.05,P<0.01）;提示氧化苦参碱的镇痛作用与GABA及GABAA受体有关。5.氧化苦参碱对小鼠大脑皮层、海马、丘脑和脊髓背角GABAA受体免疫阳性细胞及其蛋白表达的影响腹腔注射氧化苦参碱180mg/kg可以增加小鼠脊髓背角、大脑皮层及海马处GABA ARα1免疫阳性神经细胞数目增多（P<0.01）,使脊髓后角平均光密度、平均灰度值增加,表达增强（P<0.01）;可以明显增加福尔马林致痛小鼠脊髓背角和大脑皮层GABA ARα1的蛋白表达。提示中枢GABAA受体参与了氧化苦参碱的镇痛作用。结论氧化苦参碱具有明显的镇痛作用;在其镇痛作用剂量下无成瘾性和耐药性;其镇痛作用部位涉及中枢和外周,中枢镇痛强度明显优于外周作用;氧化苦参碱的镇痛作用与GABA递质/受体系统功能的增强有关,其中GABA ARα1是其作用靶标之一。