导读:本文包含了体内骨生物反应器论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:骨组织工程,体内生物反应器,血管化,骨缺损
体内骨生物反应器论文文献综述
张海峰,韩冬[1]（2014）在《体内生物反应器在骨组织工程血管化中的研究进展》一文中研究指出目的总结体内生物反应器在促进组织工程骨血管化方面的应用以及研究进展。方法查阅国内外近年有关体内生物反应器在促进组织工程骨血管化方面的相关文献,并进行综合分析。结果体内生物反应器可由骨膜、肌肉、肌层膜、筋膜瓣及生物材料构建,它能有效促进组织工程骨血管化,尤其对于较大骨缺损的修复重建具有重要意义。但目前相关研究以动物实验为主,临床试验有待进一步开展。结论随着骨组织工程相关技术的发展,体内生物反应器有望解决组织工程骨血管化这一问题,具有潜在的临床应用价值。(本文来源于《中国修复重建外科杂志》期刊2014年09期）
李会波[2]（2013）在《生物反应器内应用富血小板血浆构建组织工程骨体内血管化的评估的实验研究》一文中研究指出目的股骨头缺血性坏死是骨科常见疾患,股骨头坏死是由于股骨头内压力增高,股骨头骨组织不能得到营养血管的正常供血,使股骨头组织中的骨细胞、骨髓、造血细胞、其他细胞发生坏死。治疗股骨头坏死是当今世界的一大难题,股骨头坏死的主要原因是由于股骨头的血运被破坏,从而引起了骨细胞及骨髓成分死亡及随后的修复,继而导致股骨头结构改变、股骨头塌陷、关节功能障碍的疾病。本实验主要是应用组织工程技术,构建组织工程化骨来评估体内血管化的过程,进而为重建股骨头的血运提供一种可行性方案。本实验取新西兰大白兔的骨髓间充质干细胞,应用富血小板血浆(PRP)进行体外培养,然后与生物相容性好的支架材料β-TCP结合进行培养,由于β-TCP叁维空间具有更多的延伸方向,有助于控制干细胞生长行为,提高单位扩增速率,适于在微重力体系中模拟体内组织细胞的生长微环境,适应剪切力,促进骨分化。另一方面,β-TCP本身可以作为一种很好的存贮和控释给药系统,在培养过程中逐步释放骨诱导生长因子。最后将复合体放入生物反应器中进行叁维培养,构建组织工程化骨,将构建的组织工程化骨植入动物体内,3月后处死动物,取材,标本观察,PCR及ELISA等实验技术来观察血管特异性标志物,从而用来评价该种构建组织工程化骨对于血管化的影响,从而为重建股骨头血运提供一种可行性方案。材料和方法1取2-3月龄的健康的新西兰大白兔,麻醉好后放于实验台,备皮,固定,消毒,铺无菌巾,在无菌条件下用穿刺针抽取双侧胫骨平台内下侧骨髓5ml,梯度密度离心法结合贴壁培养法提取BMSCs,进行原代、传代细胞培养。流式细胞仪鉴定。2经兔耳缘静脉抽取新鲜血液约10ml,在无菌条件下,迅速加入到盛有1ml5%枸橼酸钠的15ml离心管中,轻轻摇晃,防止凝固。3制备富血小板血浆(PRP),将上述离心管中的血液放入离心机中,采用二次离心法制备富血小板血浆,第一次离心3300转／分,第二次离心3000转／分,然后得到无色透明的胶冻状物质即是富血小板血浆。4将制备的富血小板血浆加入到培养基中,3天换液一次,培养BMSCs.5将用富血小板血浆培养的BMSCs制成约1ml的细胞悬液,滴加到β—磷酸三钙(β-TCP)上,构建细胞支架复合体,然后放入生物反应器中用含有富血小板血浆的培养基培养3周。6将在生物反应器中培养的复合体取出,植入到新西兰大白兔的皮下,缝合,叁个月以后,取出复合体材料,然后免疫组化检测血管标志物CD31,.第Ⅷ因子关连抗原(VWF)的表达。结果1.对于细胞形态学上的变化,可以采用倒置相差显微镜来观察,1-3日后在显微镜下可以观察到有少量的兔骨髓间充质干细胞贴壁,形状呈不规则的短梭形。数日之后培养瓶中出现细胞集落群,7-8天后,这种细胞集落群广泛出现。两周以后,骨髓间充质干细胞可基本铺满瓶底。铺满瓶底后,进行细胞传代,贴壁较原代细胞快,细胞核较大,胞浆内颗粒较原代细胞多。加入富血小板血浆(PRP)后,细胞的生长速度较以前明显加快,细胞排列规整,呈明显的漩涡状生长。2.β—磷酸三钙(β-TCP)上电镜扫描可见有细胞粘附,细胞伸出伪足和p—磷酸叁钙(β-TCP)相连接,细胞在β-TCP多孔陶瓷支架上的黏附、伸展和增殖良好。3.实验组免疫组化结果显示血管标志物CD31,第Ⅷ因子关连抗原(VWF)呈强阳性表现。4.富血小板血浆富含多种细胞因子,可以诱导成骨或软骨,可以促进血管化的过程。结论1.原代细胞培养一天后,于倒置相差显微镜下观察可见有细胞贴壁,呈小圆形。第二天可见有不规则性的骨髓间充质干细胞细胞贴壁,叁日后,细胞的形态发生变化,呈不规则的短梭状(图3)。一周后,细胞体积明显增大,培养瓶中出现细胞集落群,数日后,这种细胞集落群广泛出现。两周以后,骨髓间充质干细胞可基本铺满瓶底,呈螺旋簇状生长(图4),细胞可基本长满瓶底,生长均匀,细胞伸展充分,形态均一,并开始向多角型细胞转化,呈明显的旋涡状生长。2.骨髓间充质干细胞是组织工程中较理想的种子细胞。因为骨髓间充质干细胞来源比较丰富,取材也方便,同时分离方法也较简单,采用淋巴细胞分离液可以分离大量的骨髓间充质干细胞,具有稳定的体外培养性能,并且易于传代。3.富血小板血浆富含多种细胞因子,可以诱导成骨或软骨,可以促进血管化的过程。4.β—磷酸三钙(β-TCP)在组织工程支架材料的选择方面具有较多的优势,由于其较好的组织相容性和叁维立体结构,所以,骨髓间充质干细胞适合于在β—磷酸三钙(β-TCP)支架材料上黏附和增殖。5.灌注型生物反应器对骨髓间充质干细胞产生力学刺激,可以使细胞在叁维支架材料上更好的黏附和增殖。(本文来源于《山东大学》期刊2013-05-09）
唐闻佳[3]（2012）在《外来器官有了营养补给站》一文中研究指出1996年，曹谊林在美国Vacanti实验室内主要完成的“人耳鼠”一经报道，立刻引发了人们对“人体器官工厂”的无限遐想，“组织工程学”也由此成为医学界的“当红辣子鸡”。可时隔十多年，“人造器官”却迟迟不见用于人体。一大难题是组织工程器官再血管化，由此衍生(本文来源于《文汇报》期刊2012-02-17）
李运峰,包崇云[4]（2008）在《体内生物反应器与体内骨组织工程》一文中研究指出近年来,骨组织工程研究在种子细胞、支架材料和构建技术3个主要方面均取得了巨大进展,但复合体外培养细胞的骨组织工程产品临床应用仍面临挑战。体内骨组织工程是以受体自身机体作为生物反应器,单纯应用生物材料而不外加细胞或生长因子,在骨或非骨环境构建形成骨移植物修复自体骨缺损的技术。有关研究显示这是一种调动机体自我再生能力的组织工程新策略,具有切实可行的应用前景。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2008年46期）
袁伟,王臻,卢建熙,朱以芳,李爱民[5]（2007）在《新型骨组织工程体内生物反应器内晶体液交换规律》一文中研究指出建立一种新型的骨组织工程体内生物反应器,观察该生物反应器内的晶体液及溶质交换指标,评价该体内生物反应器应用于骨组织工程细胞培养的可行性。①将12只成年新西兰大白兔随机分为两组,每组6只,分为含和不含不锈钢支撑架的两组。在每只白兔背部利用筋膜建立一个含或不含不锈钢支撑架的筋膜囊袋(生物反应器)。按统一标准构成2cm×2cm的筋膜包囊。②24h后经检验筋膜囊袋确认密闭性良好,再向囊袋内内注入2mL生理盐水。③在注入生理盐水后0h、1h、2h、3h、4h时间点,在直视下抽吸残余液体,测定液体量后再测定残液内Ca2+,PO43-,Na+,K+,Cl-等离子浓度和pH值,同时测定兔血浆相应离子浓度。此新型体内生物反应器内在注入晶体液后,迅速和血浆进行溶质交换,随时间推移晶体液内离子成分浓度向血浆靠近,4h后晶体液基本吸收完全,含支架组与不含支架组的晶体液吸收速率不存在差异(P=0.067),初步测定晶体液吸收速率为:0.125mL/(h·cm2)。说明此新型体内生物反应器内晶体液渗透速率较快,能和体内内环境之间进行快速的物质交换,同时培养器容积可以满足培养长节段人工骨的需要,具备进行体内组织工程骨细胞复合结构中细胞营养交换的基本要求。(本文来源于《科学技术与工程》期刊2007年16期）
黄晨昱[6]（2007）在《体内骨生物反应器成骨的实验研究》一文中研究指出目的本研究通过构建体内骨生物反应器形成新生骨组织，以达到应用自体骨修复骨缺损的目的。方法以藻酸钠或壳聚糖为主成分研制可吸收可注射的含钙液态胶体支架材料(SA、SD及CS)。以新西兰大白兔、狗为实验动物模型，在兔的胫骨、颅骨和狗的胫骨的骨膜下注射生理盐水，通过液压的力量使骨膜与其下方的骨质分离形成骨膜下腔骨生物反应器，将胶体支架材料注射入骨膜下腔骨生物反应器内，这种钙凝胶可从骨膜下层招募大量的种子细胞和细胞因子到骨生物反应器内形成新生的骨组织；应用分子生物学、组织学、细胞学、生物力学、影像学等方法研究其成骨的质和量，并初步探讨成骨机制。建立兔、狗胫骨皮质缺损修复的实验动物模型，于胶体骨膜下注射后8W将新生的骨组织与母体骨分离移植到对侧的胫骨皮质缺损内，应用组织学、影像学等方法观察修复效果。结果从骨生物反应器内取材研究，胶体骨膜下注射1W、2W时有Ⅰ型胶原mRNA表达，4W时骨钙素蛋白阳性表达，天狼星红染色阳性；8W时钙结节沉积好，成骨明显，且易与母体骨分离，成骨力学指标可达正常水平。胶体注射后早期亦有Ⅱ型胶原mRNA表达和甲苯胺蓝染色阳性表达。成骨取材移植后成活好。结论研制的可吸收可注射的叁种含钙液态胶体支架材料生物相容性好，具有良好的可塑性。体内胫骨和颅骨骨生物反应器的成骨质量好，可作为一种新的自体骨来源供移植用。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2007-06-30）
韩晓明[7]（2007）在《生物反应器培养大鼠胰岛—睾丸支持细胞复合体及体内移植的实验研究》一文中研究指出胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病的一种非常有效的方法。但是胰岛在体外分离过程中其活力会受到不同程度的损伤，另外胰岛移植还会引发强烈的免疫排斥反应，从而影响移植的效果。如何获得高活力的胰岛，并降低其免疫原性已经成为胰岛移植领域研究的热点。本研究拟在体外分离、培养胰岛和睾丸支持细胞(Sertoli Cell，SC)，并对胰岛和SC的形态和功能进行相关检测；在生物反应器中共培养大鼠胰岛和SC，形成胰岛和SC复合体(Sertoli Islet Culture Aggregates，SICA)。对其在形态和功能上进行相关检测。在此基础上，SICA进行体内移植，观察其在体内的存活及对糖尿病大鼠血糖的影响等。通过上述研究，在体外获得了功能良好的SICA。将其进行糖尿病大鼠体内移植后，大鼠存活率显着提高且存活时间明显延长。结果表明，SICA对未来胰岛移植研究具有重要的意义。本研究主要包括以下四个部分：一、大鼠胰岛的分离、纯化与培养大鼠胰岛的分离方法常采用Dextran密度梯度离心的方法，在分离过程中常需要对胰腺组织进行二次震荡消化。本研究在前期研究的基础上，对Dextran密度梯度离心方法进行改进，在分离过程中取消了二次震荡消化过程。结果表明，改进方法后获得的胰岛具有更好的活力。葡萄糖刺激实验显示，改进方法后分离的胰岛具有更好的胰岛素分泌能力。此外，本研究还对牛血清白蛋白(BSA)在分离过程中的保护作用进行了初步研究。结果表明，在分离液中加入BSA后得到的胰岛具有更好的胰岛素分泌能力。为了进一步探讨能保持胰岛活力和功能的最佳培养条件，本研究在成功分离纯化胰岛的基础上，将胰岛放入旋转式生物反应器(Rotary Wall Vessel，RWV)中进行叁维培养，结果表明，与普通平皿培养相比，经生物反应器培养的胰岛存活率和胰岛素分泌能力均得到进一步的提高。二、SC的分离培养及功能研究本研究通过Ⅴ型胶原酶单次消化法分离获得SC。通过免疫组化进行检测。结果表明，原代分离的细胞具有良好的活力，～95％细胞呈Fas-L免疫组化染色阳性。为探讨SC的功能，我们制备了SC的条件培养基，并用其培养淋巴细胞和胰岛。通过流式细胞术检测淋巴细胞的凋亡情况。结果表明，SC在体外能够诱导淋巴细胞的凋亡。对条件培养基培养的胰岛进行葡萄糖刺激实验，检测结果表明，共培养条件下胰岛的胰岛素分泌功能明显提高。叁、生物反应器培养大鼠胰岛-睾丸支持细胞复合体的研究本研究采用RWV共培养大鼠胰岛与SC，使两者形成球形复合体(SICA)。通过免疫组化和透射镜等方法对其进行检测。结果表明，SC与胰岛形成一个随机分布的复合体，并能观察到SICA中有丰富的胰岛素分泌颗粒存在，表明SICA中的胰岛B细胞具有良好的生物学活性和功能。对SICA进行葡萄糖刺激实验，进一步表明，SICA具有良好的胰岛素分泌功能。四、大鼠胰岛-睾丸支持细胞复合体的体内移植研究本研究将体外培养获得的SICA进行糖尿病大鼠的体内移植。对糖尿病大鼠血糖水平的检测结果表明，SICA移植后能够延长糖尿病大鼠的存活时间。大部分接受SICA移植的受体血糖保持正常超过60d，显着高于单纯的新分离胰岛及生物反应器培养胰岛组；组织学和免疫组化结果表明，SICA在体内存活并能分泌胰岛素。葡萄糖耐受实验表明，SICA移植受体血糖基本在2h内恢复正常，与正常大鼠对葡萄糖的耐受能力接近，说明SICA移植后仍保持对葡萄糖的敏感性及良好的血糖调节能力。有报道表明，FasL，TGF-β1是SC发挥免疫豁免作用中起重要作用的两个细胞因子。我们在本实验中还对SICA体内移植物中表达FasL，TGF-β1的细胞进行了检测。结果表明，随着时间的延长，表达FasL的细胞逐渐减少，而表达TGF-β1的细胞仍然保持较高的水平。对抗FasL和TGF-β1抗体体内移植影响血糖的实验研究表明，FasL的减少并不影响SICA在移植大鼠体内正常的功能。与此相反，一旦TGF-β1减少，SICA的功能受到很大影响，导致移植大鼠的血糖升高。这说明在移植后SICA的活力与TGF-β1表达水平有关。推测TGF-β1可能在SC发挥免疫豁免作用中起重要作用。综上所述，我们在体外形成的SICA具有良好的生物学活性，移植后能够显着延长糖尿病大鼠的存活时间。这为胰岛移植治疗糖尿病奠定了相关的细胞生物学研究基础。(本文来源于《中国人民解放军军事医学科学院》期刊2007-05-24）
邹昌勇,杜厚明,冷武军,朱俊铭,喻远祥[8]（1998）在《应用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞生产体内治疗用WuT3单克隆抗体》一文中研究指出用3．5L和14L生物反应器培养WUT3杂交瘤细胞，结果表明用人血清可以代替牛血清培养WuT3细胞，在1％人血清培养液中添加适当营养成分，可达到10％小牛血清浓度下的细胞浓度（1．5×106／ml）和单抗产量（大于50μg／ml）。放大到75L生物反应器中采用半连续方式培养，建立了中试培养工艺流程和质控点，收获时细胞浓度为1.0×106～1．5×106／ml，单抗产量为40～70μg／ml，平均日产单抗达1g。在3．5L、14L、75L逐级放大培养过程中，细胞支原体为阴性，收获上清中单抗免疫活性合格，热原试验合格。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊1998年01期）
体内骨生物反应器论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的股骨头缺血性坏死是骨科常见疾患,股骨头坏死是由于股骨头内压力增高,股骨头骨组织不能得到营养血管的正常供血,使股骨头组织中的骨细胞、骨髓、造血细胞、其他细胞发生坏死。治疗股骨头坏死是当今世界的一大难题,股骨头坏死的主要原因是由于股骨头的血运被破坏,从而引起了骨细胞及骨髓成分死亡及随后的修复,继而导致股骨头结构改变、股骨头塌陷、关节功能障碍的疾病。本实验主要是应用组织工程技术,构建组织工程化骨来评估体内血管化的过程,进而为重建股骨头的血运提供一种可行性方案。本实验取新西兰大白兔的骨髓间充质干细胞,应用富血小板血浆(PRP)进行体外培养,然后与生物相容性好的支架材料β-TCP结合进行培养,由于β-TCP叁维空间具有更多的延伸方向,有助于控制干细胞生长行为,提高单位扩增速率,适于在微重力体系中模拟体内组织细胞的生长微环境,适应剪切力,促进骨分化。另一方面,β-TCP本身可以作为一种很好的存贮和控释给药系统,在培养过程中逐步释放骨诱导生长因子。最后将复合体放入生物反应器中进行叁维培养,构建组织工程化骨,将构建的组织工程化骨植入动物体内,3月后处死动物,取材,标本观察,PCR及ELISA等实验技术来观察血管特异性标志物,从而用来评价该种构建组织工程化骨对于血管化的影响,从而为重建股骨头血运提供一种可行性方案。材料和方法1取2-3月龄的健康的新西兰大白兔,麻醉好后放于实验台,备皮,固定,消毒,铺无菌巾,在无菌条件下用穿刺针抽取双侧胫骨平台内下侧骨髓5ml,梯度密度离心法结合贴壁培养法提取BMSCs,进行原代、传代细胞培养。流式细胞仪鉴定。2经兔耳缘静脉抽取新鲜血液约10ml,在无菌条件下,迅速加入到盛有1ml5%枸橼酸钠的15ml离心管中,轻轻摇晃,防止凝固。3制备富血小板血浆(PRP),将上述离心管中的血液放入离心机中,采用二次离心法制备富血小板血浆,第一次离心3300转／分,第二次离心3000转／分,然后得到无色透明的胶冻状物质即是富血小板血浆。4将制备的富血小板血浆加入到培养基中,3天换液一次,培养BMSCs.5将用富血小板血浆培养的BMSCs制成约1ml的细胞悬液,滴加到β—磷酸三钙(β-TCP)上,构建细胞支架复合体,然后放入生物反应器中用含有富血小板血浆的培养基培养3周。6将在生物反应器中培养的复合体取出,植入到新西兰大白兔的皮下,缝合,叁个月以后,取出复合体材料,然后免疫组化检测血管标志物CD31,.第Ⅷ因子关连抗原(VWF)的表达。结果1.对于细胞形态学上的变化,可以采用倒置相差显微镜来观察,1-3日后在显微镜下可以观察到有少量的兔骨髓间充质干细胞贴壁,形状呈不规则的短梭形。数日之后培养瓶中出现细胞集落群,7-8天后,这种细胞集落群广泛出现。两周以后,骨髓间充质干细胞可基本铺满瓶底。铺满瓶底后,进行细胞传代,贴壁较原代细胞快,细胞核较大,胞浆内颗粒较原代细胞多。加入富血小板血浆(PRP)后,细胞的生长速度较以前明显加快,细胞排列规整,呈明显的漩涡状生长。2.β—磷酸三钙(β-TCP)上电镜扫描可见有细胞粘附,细胞伸出伪足和p—磷酸叁钙(β-TCP)相连接,细胞在β-TCP多孔陶瓷支架上的黏附、伸展和增殖良好。3.实验组免疫组化结果显示血管标志物CD31,第Ⅷ因子关连抗原(VWF)呈强阳性表现。4.富血小板血浆富含多种细胞因子,可以诱导成骨或软骨,可以促进血管化的过程。结论1.原代细胞培养一天后,于倒置相差显微镜下观察可见有细胞贴壁,呈小圆形。第二天可见有不规则性的骨髓间充质干细胞细胞贴壁,叁日后,细胞的形态发生变化,呈不规则的短梭状(图3)。一周后,细胞体积明显增大,培养瓶中出现细胞集落群,数日后,这种细胞集落群广泛出现。两周以后,骨髓间充质干细胞可基本铺满瓶底,呈螺旋簇状生长(图4),细胞可基本长满瓶底,生长均匀,细胞伸展充分,形态均一,并开始向多角型细胞转化,呈明显的旋涡状生长。2.骨髓间充质干细胞是组织工程中较理想的种子细胞。因为骨髓间充质干细胞来源比较丰富,取材也方便,同时分离方法也较简单,采用淋巴细胞分离液可以分离大量的骨髓间充质干细胞,具有稳定的体外培养性能,并且易于传代。3.富血小板血浆富含多种细胞因子,可以诱导成骨或软骨,可以促进血管化的过程。4.β—磷酸三钙(β-TCP)在组织工程支架材料的选择方面具有较多的优势,由于其较好的组织相容性和叁维立体结构,所以,骨髓间充质干细胞适合于在β—磷酸三钙(β-TCP)支架材料上黏附和增殖。5.灌注型生物反应器对骨髓间充质干细胞产生力学刺激,可以使细胞在叁维支架材料上更好的黏附和增殖。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体内骨生物反应器论文参考文献
[1].张海峰,韩冬.体内生物反应器在骨组织工程血管化中的研究进展[J].中国修复重建外科杂志.2014
[2].李会波.生物反应器内应用富血小板血浆构建组织工程骨体内血管化的评估的实验研究[D].山东大学.2013
[3].唐闻佳.外来器官有了营养补给站[N].文汇报.2012
[4].李运峰,包崇云.体内生物反应器与体内骨组织工程[J].中国组织工程研究与临床康复.2008
[5].袁伟,王臻,卢建熙,朱以芳,李爱民.新型骨组织工程体内生物反应器内晶体液交换规律[J].科学技术与工程.2007
[6].黄晨昱.体内骨生物反应器成骨的实验研究[D].中国协和医科大学.2007
[7].韩晓明.生物反应器培养大鼠胰岛—睾丸支持细胞复合体及体内移植的实验研究[D].中国人民解放军军事医学科学院.2007
[8].邹昌勇,杜厚明,冷武军,朱俊铭,喻远祥.应用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞生产体内治疗用WuT3单克隆抗体[J].中国生物制品学杂志.1998