一氧化氮对小鼠胚胎植入的影响

论文摘要

本研究采用子宫角注射方法研究了一氧化氮（NO）对小鼠胚胎植入的影响。受试小鼠于妊娠第2天（D2）在一侧子宫角内注射0.2mg/只一氧化氮合酶（NOS）抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L—NAME）或注射L-NAME0.2mg+ SNP10μg/只,另一侧子宫角为对照侧;小鼠分别于D4、D5、D6、D8颈椎脱臼处死,观察并统计每组每侧子宫角植入胚胎数。结果发现,与对照侧相比,L-NAME 0.2mg/只处理组植入胚胎数降低;在L-NAME中加入NO供体硝普钠（SNP）时,则不影响胚胎植入数。为进一步探讨NO在胚胎植入中的作用机理,采用RT-PCR方法分别对各组小鼠子宫内膜基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因mRNA的表达水平进行了检测,探讨了胚胎附植前期、附植期和附植后期子宫MMP-9基因表达水平的变化和NO对子宫MMP-9基因表达的影响。结果显示:与对照侧相比,L-NAME0.2mg/只处理组子宫中MMP-9活性显著下降;L-NAME与SNP合并应用后,MMP-9的活性恢复正常,结果表明,NO对小鼠胚胎植入起促进作用,这种作用可能是通过影响MMP-9的活性实现的。同时,还采用了组织切片的方法,光镜观察了一氧化氮对小鼠子宫及其内膜形态变化及脱膜化的影响。结果显示:附植过程中,妊娠侧的子宫内膜发育明显,上皮细胞增高,腺体发达,间质疏松,间质细胞增大,发生明显的蜕膜样变。相比较而言,抑制侧子宫内膜柱状上皮细胞相对较低,腺体数少,子宫内膜在附植后期出现较明显退行性变化,基质变得紧密。所以综合以上的结果可以得出:一氧化氮作为一种内源性平滑肌松驰剂和血管扩张剂,对子宫内膜MMP-9mRNA的表达有着极为显著的调节作用,在附植过程中一氧化氮合酶受到抑制后能显著降低MMP-9基因的表达,并进一步影响子宫内膜发育和胚胎的附植。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1.研究背景
• 2.文献综述
• 3.研究的目的与意义
• 材料与方法
• 1.试验材料
• 2.试验方法
• 结果与分析
• 1 子宫角注射实验结果
• 2 MMP-9半定量RT-PCR
• 2.1 总RNA提取结果
• 2.2 退火温度、循环次数和引物浓度的选择
• 2.3 未妊组小鼠子宫MMP-9的表达检测结果
• 2.4 妊娠对照侧子宫MMP-9的表达检测结果
• 2.5 抑制剂处理侧MMP-9的表达检测结果
• 2.6 抑制剂与SNP并用处理侧MMP-9的表达检测结果
• 2.7 试验各侧子宫MMP-9基因的相对表达量
• 2.8 附植过程中对照侧子宫MMP-9mRNA的表达特征
• 2.9 附植各时期NOS抑制侧子宫的MMP-9mRNA的表达特征
• 2.10 对照侧与NOS抑制侧小鼠附植各时期MMP-9mRNA的表达量差异
• 3 子宫内膜组织形态学观察结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介