抗HBV S蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的研究

论文摘要

目的:乙型肝炎病毒感染危害巨大,慢性乙型肝炎至今仍缺乏有效的治疗手段和解决方法,乙肝病毒感染机制的研究进展相对滞后是严重影响新型治疗方法和药物研发的重要原因之一。HBsAg是机体感染乙型肝炎病毒（HBV）的标志,也是机体感染HBV后血清中首先出现的病毒标志物,在临床上早期诊断乙型肝炎以及应用于HBV的科研方面,有重要意义。本研究拟通过制备抗HBV S蛋白的单克隆抗体,对抗体生物学特性进行鉴定,为进一步研究HBV奠定基础。方法:对购买的重组乙肝疫苗以SDS-PAGE进行初步鉴定,并以间接ELISA方法鉴定其所含HBV S蛋白的特异性和免疫活性。以此重组乙肝疫苗免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗HBV S蛋白的单克隆抗体,用间接ELISA法筛选分泌抗HBV S蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用间接ELISA方法和Western blot方法进行McAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定McAb的Ig亚类,检测McAb的效价及相对亲和力;并对杂交瘤细胞的染色体进行分析。结果:购买的重组乙肝疫苗所含的HBV S蛋白纯度高,无降解,具有良好的特异性及免疫原性。通过杂交瘤技术成功获得1株可分泌特异性McAb的杂交瘤细胞4D2。其抗体亚类为IgG1;将生长良好的杂交瘤细胞接种到预处理的Balb/c小鼠腹腔中制备腹水型单抗,间接ELISA试验证实腹水效价可达1:108,相对亲和力在105以上。间接ELISA法和Western bolt检测证明这株杂交瘤细胞所分泌的McAb特异性良好。结论:我们用购买的重组乙肝疫苗成功地制备出抗HBV S蛋白的McAb,所得抗体具有生物学活性,为建立快速特异检测HBV感染的实验方法提供了有力的工具。

论文目录

• 符号说明
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 重组乙肝疫苗的性质鉴定
• 前言
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 抗HBV S 蛋白单克隆抗体的制备及生物学特性的研究
• 前言
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 硕士期间发表论文情况