论文摘要
水稻白叶枯病（Bacterial blight,BB）是世界水稻生产中的主要病害之一,也是我国水稻高产、稳产的主要限制因素之一。随着水稻基因组的测序完成,以及白叶枯病菌在水稻上的致病特异性,水稻与白叶枯病菌的互作研究已经成为现今研究植物-病原菌相互关系的首选材料。同时,利用抗性基因选育抗病品种是防治白叶枯病的有效手段,目前国际上命名的水稻白叶枯病基因已达30个之多。中国农业科学院作物科学研究所从普通野生稻（Oryzae rufipogon）中发掘鉴定的新基因Xa23是迄今发现的抗谱最广、抗性转移效应最强的全生育期完全显性的白叶枯病抗性基因,不同遗传背景的F1植株从苗期到成株期均表现高度抗病,是改良水稻、特别是杂交稻白叶枯病抗性的优异抗源,迄今,在自然界未发现能使Xa23致病的白叶枯菌株。水稻白叶枯病由黄单胞杆菌水稻致病变种（Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo）引起。水稻黄单胞杆菌PXO99是迄今发现的致病性最强、致病谱最广的菌株,除携带有Xa23的水稻品种CBB23外,几乎对所有的水稻品种致病。于是,我们用抗谱最广的水稻CBB23（Xa23）与致病谱最广的白叶枯病菌PXO99为材料,研究植物与病原菌之间典型的特异性互作关系。克隆PXO99对CBB23（Xa23）的致病基因,将有助于阐明白叶枯病菌的广谱致病性机理。我们实验室利用Tn5转座系统,建立了容量为24192个突变体菌的PXO99突变体库,本研究以每个突变菌株对应一株水稻的方式,通过大量的人工剪叶接种,筛选了包含24192个突变体的Tn5-PXO99突变体库,经过初步筛选,获得121个可疑致病突变菌株,然后采用注射接种和人工剪叶接种相结合的接种鉴定方法,经过反复筛选鉴定,最终确认14个可使CBB23（Xa23）水稻产生不同严重程度的致病症状的突变菌株,并对这14个致病突变体进行PCR分子检测Tn5的插入,Southern检测转座子Tn5插入拷贝数。在这14个致病突变体中,我们选择了两个单拷贝Tn5插入、致病性较强的致病突变体XMS-16、XMS-86进行侧翼序列分析,通过PCR walking的方法,分离出Tn5插入位点侧翼片段并测序。通过比对Xoo KACC10331genomic DNA序列,发现转座子Tn5在XMS-16和XMS-86基因组中的插入位点分别位于该基因组的788957bp处和3254316bp处,分别破坏了基因Xoo0774和Xoo3031,基因Xoo0774编码一个158个氨基酸的外膜蛋白,基因Xoo3031为一个编码330个氨基酸的细胞色素过氧化物酶CCPs。对这两个基因进行了生物信息学分析,并讨论了这两个基因可能的致病机理。