黏菌主要种原质团的培养、生物学特性及其对细菌吞噬作用的研究

论文摘要

黏菌是自然界中一类特殊的真核生物,由于拥有原生质团和孢子果两个特殊的发育阶段,所以同时具有原生动物和真菌的特性,其天然产物具有抗肿瘤、细胞毒性、抑菌等作用。由于黏菌个体小,培养困难,使其应用受了极大限制。本实验通过多种培养方式对黏菌的生物学特性和活性进行了研究,以期为黏菌的应用提供理论依据。实验结果如下：采用不同培养基及营养液对淡黄绒泡菌Physarum melleum,全白绒泡菌Physarum globuliferum,小绒泡菌Physarum pusillum,棒形半网菌Hemitrichia clavata,蛇形半网菌Hemitrichia serpula,半网拟发网菌Stemonitopsis hyperopta,暗红团网Arcyria denudata,粉红团网Arcyria incarnata,灰团网Arcyria cinerea,黑柄盖丝菌Badhamia affinis,紫筛菌Cribraria violacea,球形双皮菌Diderma globosum进行有饲培养。确定了部分黏菌孢子萌发和原质团生长的最适培养基及营养液。其中淡黄绒泡菌、全白绒泡菌和小绒泡菌的最适萌发培养基组合为燕麦培养基、松针水营养液；棒形半网菌、粉红团网菌、灰团网菌和球形双皮菌的最适萌发培养基组合为松针水培养基、松针水营养液；蛇形半网菌的最适萌发培养基组合为木耳培养基、木耳营养液；暗红团网菌的最适萌发培养基组合为微量元素培养基、松针营养液。确定的最适生长培养基为：淡黄绒泡菌、全白绒泡菌、小绒泡菌最适是培养为木耳培养基；棒形半网菌、蛇形半网菌和暗红团网菌最适是培养为添加微量元素培养基；粉红团网菌、灰团网菌最适是培养为除松针培养基以外的所有培养基；球形双皮菌最适是培养为微量元素培养基和燕麦培养基。对绒泡菌目8种黏菌原质团进行了液体培养研究,根据单因素实验确定了各个种的适宜培养基和培养条件(pH、温度、转速)。最适宜培养基为燕麦液体培养基,利用正交实验,确定液体培养的最优实验结果：淡黄绒泡菌(Physarum melleum) pH 9.0,26.5℃, 110r/min;全白绒泡菌(P. globuliferum)pH 9.0,26.0℃, 100r/min;扁绒泡菌(P. compressum) pH 4.0,25.5℃, 100r/min;灰绒泡菌(P.cinereum) pH 8.0,25.5℃,100r/min;小绒泡菌(P. pusillum) pH 5.0,26.5℃, 110r/min;两瓣绒泡菌(P. bivalve) pH 6.0,25.5℃,90r/min;灰堆钙丝菌(Badhamia cinerascens) pH 7.0,26.0℃,100r/min;黑柄钙皮菌(Didymium nigripes) pH 9.0,25.0℃,110r/min。综合8种黏菌原质团液体培养的结果,总结了绒泡菌目黏菌原质团液体培养的适合培养基和培养条件,为黏菌原质团的发酵奠定了基础。分别采用甲醇、丙酮、氯仿、石油醚对灰绒泡菌子实体进行代谢产物提取,利用滤纸片法进行了灰绒泡菌子实体提取物的抑菌试验(金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、欧文氏菌、大肠埃希菌)。实验结果,四种灰绒泡菌子实体提取物均没有抑菌活性,但也为灰绒泡菌成分研究提供了借鉴。由于黏菌原质团可以吞噬营养物质(包括细菌),所以我们在实验中进行了淡黄绒泡菌Physarum melleum、全白绒泡菌Physarum globuliferum、扁绒泡菌Physarum compressum、小绒泡菌Physarum pusillum、两瓣绒泡菌Physarum bivalve、灰堆钙丝菌Badhamia cinerascens、黑柄钙皮菌Didymium nigripes等7个种的黏菌原质团对细菌(金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、欧文氏菌、大肠埃希菌)的吞噬探究。确定了原质团和细菌均可共同生长的培养基,同时明确了不同黏菌原质团对于不同细菌的不同吞噬形式,初步认定原质团中存在抑菌酶。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 黏菌的研究概况
• 1.1 国外研究现状
• 1.1.1 黏菌的培养
• 1.1.2 黏菌的化学研究
• 1.1.3 黏菌的分类学研究
• 1.2 国内研究现状
• 1.2.1 黏菌资源调查
• 1.2.2 黏菌的培养研究
• 第二章 不同培养基及营养液对于黏菌有饲培养的影响
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌种来源
• 2.1.2 实验设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 培养基及营养液制备
• 2.2.2 孢子萌发最优培养基确定
• 2.2.3 原质团最优生长培养基确定
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 孢子萌发最优培养基确定
• 2.3.2 原质团生长最优培养基确定
• 2.4 讨论
• 2.4.1 孢子的萌发培养
• 2.4.2 原质团的固体培养
• 第三章 绒泡菌目部分黏菌原质团液体发酵研究
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验菌种
• 3.1.2 实验设备
• 3.1.3 黏菌原质团生物量分析软件
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 有饲培养
• 3.2.2 发酵培养
• 3.2.3 黏菌原质团生物量测定及分析
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 发酵培养基筛选
• 3.3.2 液体发酵培养条件优化
• 3.3.3 正交试验设计与结果
• 3.4 结论与讨论
• 3.4.1 发酵过程中原质团生长状况
• 3.4.2 讨论
• 第四章 灰绒泡菌子实体提取物抑菌活性研究
• 4.1 实验材料
• 4.1.1 实验菌种
• 4.1.2 指示菌
• 4.1.3 指示菌培养基
• 4.1.4 实验仪器
• 4.1.5 实验试剂
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 供试品的制备
• 4.2.3 指示菌的培养
• 4.2.4 抑菌试验
• 4.3 实验结果
• 4.4 讨论
• 第五章 黏菌原质团对细菌吞噬的活性研究
• 5.1 实验材料
• 5.1.1 菌种来源
• 5.1.2 实验设备
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 有饲培养
• 5.2.2 培养基筛选及原质团吞噬细菌研究
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 培养基筛选结果
• 5.3.2 原质团吞噬细菌结果
• 5.3.3 原质团对细菌菌落的吞噬形式
• 5.3.4 原质团中总蛋白的抑菌活性研究
• 5.4 讨论
• 第六章 结论
• 6.1 不同培养基及营养液对于黏菌有饲培养的影响
• 6.2 黏菌原质团液体培养研究
• 6.3 灰绒泡菌子实体提取物抑菌活性研究
• 6.4 黏菌原质团对细菌吞噬的活性研究
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介