一氧化氮与玉米素反应机理的研究

论文摘要

一氧化氮（NO）是一种生物活性分子,越来越多的证据表明它是生物体内分布最为广泛的信号分子。NO作为植物生长发育的一个关键调节因子,能对各种生物或非生物胁迫产生应答,在植物生长发育与环境互作的协调过程中起到中枢性的作用。在生物体内一氧化氮和超氧离子结合迅速生成过氧亚硝酸根（ONOO-）,ONOO-是一种氧化、硝化剂,它能以多种方式损伤机体组织。有研究报道,具有较高内源细胞分裂素含量的植物突变体对一氧化氮不敏感,为解析高浓度细胞分裂素抗NO作用的分子机制,本文采用理化方法检测了NO（植物体内常以ONOO-的形式存在）与玉米素直接反应的可能性。高效液相色谱、质谱结果表明:NO（ONOO-）能与玉米素直接发生化学反应。反应产物经制备色谱分离后,应用紫外、质谱和核磁等进行结构鉴定:反应所生成的三种产物分别为:8-硝基-玉米素、N6-硝基-玉米素和N6-亚硝基-玉米素。通过pH、碳酸氢钠（释放CO2）等对ONOO-与玉米素反应的影响,结合相关文献,证明ONOO-和玉米素反应是自由基机理。因此,我们认为NO和O2-在体内快速形成的ONOO-能与细胞分裂素发生硝化及亚硝化反应,将NO作为硝基（或亚硝基）传递给细胞分裂素,导致NO含量的下降。我们推测,在植物体内的生理条件下,细胞分裂素通过与NO的反应维持二者的相对稳态平衡;同时,细胞分裂素通过清除NO而发挥了抗氧化剂的功能,使细胞维持相对稳定的氧化还原状态,这对于植物的正常生长发育研究是十分重要的。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 文献综述
• 1.1 一氧化氮与过氧亚硝酸根离子
• 1.1.1 NO在动物体内的产生及生理功能
• 1.1.2 NO在植物体内的产生及生理功能
• -）在生物体内的产生'>1.1.3 过氧亚硝酸根离子（ONOO^-）在生物体内的产生
• 1.1.4 过氧亚硝酸根离子的反应途径
• 1.1.5 过氧亚硝酸根离子的性质
• 1.1.5.1 强氧化性
• 1.1.5.2 硝化反应
• 1.1.5.3 引发自由基链反应
• -与NO反应性的差别'>1.1.5.4 ONOO^-与NO反应性的差别
• -的生理、病理损伤'>1.1.6 ONOO^-的生理、病理损伤
• 1.1.6.1 生理作用
• 1.1.6.2 病理损伤作用
• 1.1.6.3 与心血管疾病的关系
• -对DNA的损伤及生物效应'>1.1.7 ONOO^-对DNA的损伤及生物效应
• -对DNA碱基的修饰'>1.1.7.1 ONOO^-对DNA碱基的修饰
• -引起DNA的损伤与癌症'>1.1.7.2 ONOO^-引起DNA的损伤与癌症
• -与NO反应性的差别'>1.1.8 ONOO^-与NO反应性的差别
• -的产生'>1.1.8.1 防止ONOO^-的产生
• -的清除'>1.1.8.2 ONOO^-的清除
• -的测定方法'>1.1.9 ONOO^-的测定方法
• 1.1.9.1 荧光探针氧化法
• 1.1.9.2 化学发光探针法
• 1.2 细胞分裂素的化学结构和功能
• 1.2.1 细胞分裂素的结构
• 1.2.2 细胞分裂素的功能
• 1.2.3 NO和细胞分裂素的互作
• 1.3 论文的立题根据和目标
• 参考文献
• 2 过氧亚硝酸根离子与玉米素反应产物的结构分析
• 2.1 引言
• 2.2 试剂与仪器
• 2.3 实验方法
• -标准溶液的制备'>2.3.1 ONOO^-标准溶液的制备
• -与玉米素的反应条件'>2.3.2 ONOO^-与玉米素的反应条件
• 2.3.3 反应产物的分离及制备
• 2.3.4 纯度的检测
• 2.3.5 反应产物的结构分析
• 2.3.5.1 液相质谱条件
• 2.3.5.2 高分辨ESI-TOF质谱测定条件
• 2.3.5.3 化学还原法
• 2.3.5.4 核磁测定
• 2.4 结果与讨论
• -的反应条件'>2.4.1 玉米素和ONOO^-的反应条件
• 2.4.2 制备色谱流动相的选择
• 2.4.3 制备色谱样品溶液的预处理和产物的富集
• 2.4.4 反应产物的结构鉴定
• 2.4.4.1 紫外/可见光谱分析
• 2.4.4.2 高分辨质谱测定产物的分子式
• 2.4.4.3 产物的二级质谱分析
• 2.4.4.4 化学还原法测定
• 2.4.4.5 核磁测定
• 2.5 结论
• 参考文献
• 3 过氧亚硝酸根离子与玉米素反应产物的机理探讨
• 3.1 引言
• 3.2 试剂和仪器
• 3.3 试验方法
• 3.3.1 碳酸氢钠对反应的影响
• 3.3.2 溶液的PH对反应的影响
• -的浓度对反应的影晌'>3.3.3 玉米素和ONOO^-的浓度对反应的影晌
• 3.4 结果和讨论
• 3.4.1 测定结果
• 3.4.2 反应机理探讨
• 3.5 结论
• 参考文献
• 附录:HPLC-MS/MS法测定动物源食品中类固醇激素残留量
• 1.1 前言
• 1.2 实验部分
• 1.2.1 仪器与试剂
• 1.2.2 标准储备液的配制
• 1.2.3 样品处理
• 1.2.3.1 样品提取
• 1.2.3.2 样品净化
• 1.2.4 液相色谱与质谱条件
• 1.2.4.1 液相条件
• 1.2.4.2 质谱条件
• 1.3 结果与讨论
• 1.3.1 提取液的选择
• 1.3.2 萃取柱的选择
• 1.3.3 淋洗剂比例的选择
• 1.3.4 色谱条件的选择
• 1.3.5 质谱条件的优化
• 1.3.6 线性范围
• 1.3.7 方法的检出限
• 1.3.8 实际样品加标回收率
• 1.3.9 方法的精密度
• 1.4 方法的应用
• 1.5 结论
• 参考文献
• 硕士期间发表和待发表的学术论文
• 致谢